甘草酸单铵盐对H9N2禽流感病毒的作用机制研究.PDFVIP

TraditionalandHerbal ·896· 中草焉Chinese Drugs第39卷第6期2008年6月 甘草酸单铵盐对H9N2禽流感病毒的作用机制研究 陈建新1’2，邱灵才1，方炳虎1，李满妹2，张晓琦2，叶文才2 (1．华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室。广东广州510642， 2．暨南大学中药及天然药物研究所，广东广州 510632) 摘要：目的 考察甘草酸单铵盐对人工感染流感和禽流感病毒小鼠肺炎的抑制作用，探讨其抗病毒作用机制。方 法 分别建立禽流感病毒H。Nz和流感病毒FM。株感染的小鼠肺炎模型，以肺指数抑制率为指标考察甘草酸单铵 盐对感染小鼠的肺炎保护效果，流式细胞仪分析感染H。Nz小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化；用鸡胚感染模型以4 种不同给药方式进行甘草酸单铵盐抗病毒机制研究。结果 甘草酸单铵盐具有减轻小鼠肺炎的实变、调整感染 H。N：小鼠脾脏T淋巴细胞亚群比例的作用；预防给药能抑制病毒在鸡胚内的复制。结论甘草酸单铵盐是通过抑 制禽流感病毒对组织细胞的吸附及调节机体细胞免疫而达到抗禽流感病毒的作用。 关键词：甘草酸单铵盐；流感病毒；禽流感病毒 中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0896一04 2003年爆发的高致病性H。N。亚型禽流感已跨1．3鸡胚：10日龄未免鸡胚，购自佛山墟岗黄畜牧 越物种屏障由禽传染给人，导致近200人死亡[1]，严有限公司；10日龄SPF鸡胚，由华南农业大学兽医 重威胁人类的生命健康。目前，人禽流感疫苗尚处于 科技中心提供。 临床试验阶段，现有的防治人高致病性禽流感药物 1．4病毒株：鸡源H。N：亚型禽流感病毒，华南农业 的疗效也较差，因此，寻找和开发新的防治禽流感药 大学兽医科技中心提供，经昆明小鼠传代获得其鼠肺 物已刻不容缓。本课题组在抗禽流感病毒(Avian适应株；流感病毒鼠肺适应FM，株(H。N：)，由中国 influenza virus，AIV)的中药筛选研究中发现甘草预防医学科学院病毒所提供，经本室鸡胚传代保存。 提取物对AIV有显著的抑制活性，能显著抑制人工 1．5试剂：LB肉汤，广东环凯微生物科技有限公 感染AIV小鼠的肺炎实变，延长感染小鼠的生存时 司；PE标记抗小鼠CD。单克隆抗体、FITC标记抗 间。对甘草酸、甘草次酸和甘草黄酮等甘草中几种主 小鼠CD。单克隆抗体、FITC标记抗小鼠CD。单克 要活性成分的抗AIV作用研究结果表明，甘草酸单 隆抗体购自美国BeckmanCoulter公司；红细胞裂 铵盐的抗AIV活性较强[2]。本实验在已有研究基础解液购自美国GenMed公司。 上，进一步比较甘草酸单铵盐对人工感染普通流感 1．6 仪器：Coulter 公司)。 病毒(FMl株，H，N，亚型)和禽流感病毒(H。N。亚 型)小鼠肺炎的抑制作用，考察甘草酸单铵盐对感 2方法 染禽流感病毒小鼠的脾脏T细胞亚群的影响及4种 2．1 药物配制：甘草酸单铵盐先用少量无水乙醇溶 不同给药方式鸡胚内抗病毒效果，初步探讨甘草酸 解，然后加生理盐水稀释至所需浓度，乙醇终体积分 单铵盐对禽流感病毒的作用机制。 数为2％；病毒唑用生理盐水稀释至所需浓度。 1材料 2．2 H9N2AIV鼠肺适应株的建立：H。N：AIV经 1．1药物：甘草酸单铵盐，惠州市东方植物保健科 SPF鸡胚复壮后，滴鼻感染SPF级昆明种小鼠，每 只0．05mL，3 技有限公司提供，质量分数98％；病毒唑，广东肇庆 d后取小鼠肺，加灭菌LB肉汤研磨， 星湖生物化学制药厂生产。 制成10％肺组织悬液，再次滴鼻感染小鼠，连续传 1．2动物：SPF级昆明小鼠，体重为13～15g和 5代以提高病毒对小鼠的毒