(ⅰ)姜黄素半互穿式羟丙甲纤维素-明胶微球给药系统研究 3b(ⅱ)ox26-ngf-β融合蛋白基因克隆及其表达纯化.pdf

摘要 第一部分 近年来，姜黄素在抗氧化、消炎、抗肿瘤、等疾病领域具有良好的药理活性， 已经成为了药物研发的热点之一。虽然如此，姜黄素却具有稳定性差、水溶性差、 生物利用度低等缺点，极大地限制了其开发成药。针对这一问题，诸如微乳制剂、 包合物技术等很多手段被提出，但是利用凝胶微球给药系统却尚未见报道。本文 试图提出一种新的由高吸水性材料羟丙甲纤维素(HPMC．Hydroxypropylmethyl network (Semi-PNgelmicrosphere，Semi．interpenetratingpolymer gelmicrosphere) 作为给药系统，来解决姜黄素稳定性差、溶出度低和生物利用度低的问题。 文章首先采用紫外分光光度法建立了姜黄素体外分析方法，发现姜黄素在 对于稳定性的研究表明光强越强、温度越高、酸性或者碱性越强，姜黄素稳定性 越差。而对于溶解度的研究则表明，在水和环己烷中姜黄素溶解度极低，在HPMC 溶液中则溶解度大大增加(达到1027p㈣，因此利用这一特点，制备 HPMC．Gelatin半互穿式凝胶微球，以解决其溶出度低的问题。 其次，通过实验确定了搅拌转速为500rpm、相比为3：l和分散剂选用单硬 酸甘油酯(用量为0．69／30mL环己烷)的反向悬浮聚合工艺。采用这一工艺，成 功制备出了9个处方的微球。用傅立呻变换红外光谱表征了半互穿网络结构的形 成；采用扫描电镜、光学显微镜和激光粒度分布仪观察微球，结果表明微球呈球 形、表面光滑、平均粒径为2019m，粒径分布窄。另外实验结果表明表明随着交 联剂用量的增加和I-IPMC含量的减少，平衡吸水倍率和吸水速率在逐渐减小， 机械强度在不断增加。空白微球的制备，为制备载药微球奠定基础。 第三，采用反相悬浮的手段，在不同交联剂和HPMC／GelatinLL例条件下，成 功制备了包载有姜黄素的载药微球，并进行了如下表征：扫描电镜和光学显微镜 观察微球的形貌：激光粒度扫描仪分析其平均粒径；傅立叶红外光谱仪表征药物 包载入球后是否保持原型；X．RD和DSC表征药物在微球中的存在形式。结果表 明载药微球呈球形，表面光滑，平均粒径为216肛m，药物以原型形式被包载进入 到微球中，有晶体形式存在。另外还通过稳定性试验，表明与原料药相比，微球 中的姜黄素稳定性有所提高，因此凝胶微球可以增加姜黄素的稳定性。 第四，文章还考察了HPMc／Gelatin比例和交联剂用量对姜黄素载药微球包封 率和体外释放的影响。结果表明随着HPMC含量的增加和交联剂的减少，包封率 有所降低，姜黄素溶出度在增加。对于体外溶出行为，采用Higuchi’S模型对有效 扩散系数D进行拟合。结果表明，随着HPMC／Gelatin比例的增加和交联剂用量的 减少，有效扩散系数在增加。 第五，采用高效液相色谱法建立了姜黄素体内分析方法，计算了药动学参数 和生物利用度。结果表明该方法符合《中国药典》的规定，该微球制剂在体内的 吸收呈单室模型，其相对于原料药的生物利用度提高了4．863±1．185倍。 通过以上研究，姜黄素借助于半互穿式HPMC．Gelatin凝胶微球这一新型的 给药系统后，溶出度、稳定性和生物利用度得到了很大提高。同时，这一给药系 统也为提高其它难溶性药物溶出，增加生物利用度提供了提供了可供借鉴的参 考。 第二部分 针对NGF无法透过血脑屏障这一问题，本文拟通过基因工程的手段，将NGF 与OX26抗体进行融合，构建一个既能透血脑屏障又能够治疗神经疾病的融合蛋 白。为此，通过PCR的方法，扩增了NGF．D基因，并将其亚克隆至pXA6载体 上。将pXA6-NGF．D质粒，转染入COS．1细胞，瞬时表达融合蛋白并收集上清。 采用Protein A亲和层析的方法从其中纯化出了融合蛋白OX26．NGF．D。采用Fc ELISA的方法测定含量，SDS—PAGE确定纯度，并结合WesternBlot的分析确认 融合蛋白构建成功。 关键词：明胶；羟丙甲纤维素；半互穿高分子网络；凝胶；微球 神经生长因子；OX26抗体；融合蛋白 ABSTRACT (PartI) Inrecent