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猪γ干扰素表达及抗病毒活性研究 　　摘要：利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从有丝分裂原刀豆素（ＣｏｎＡ）诱导的长白猪外周血淋巴细胞总ＲＮＡ中扩增出猪γ干扰素的成熟肽基因（ｍＰｏＩＦＮ－γ），并将其亚克隆到原核表达载体ｐＥＴ－２８ａ中，构建重组表达载体ｐＥＴ－ｍＰｏＩＦＮ－γ。经ＰＣＲ、酶切及测序鉴定后，转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）进行ＩＰＴＧ诱导表达，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明猪γ干扰素获得了高效表达，并具有免疫活性，表达产物约为２０．５ ｋＤａ，主要以包涵体形式存在，产物经纯化、复性得到具有生物学活性的蛋白。利用细胞病变抑制法对其在Ｈ－ＰＲＲＳＶ／Ｍａｒｃ－１４５系统上进行抗病毒活性测定，结果表明其抗Ｈ－ＰＲＲＳＶ活性为７．６８×１０３ Ｕ／ｍｇ。为进一步研究猪γ干扰素功能奠定了基础和理论依据。 　　关键词：猪γ干扰素；克隆；原核表达 　　中图分类号：Ｓ８５８；Ｑ７８文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）11－2283-04 　　 　　 Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ 　　 　　ＬＩＡＮＧ Ｗａｎｇ－ｗａｎｇ１，２，ＺＨＯＵ Ｄａｎ－ｎａ１，ＹＡＮＧ Ｋｅ－ｌｉ１，ＬＩＵ Ｚｅ－ｗｅｎ１，ＤＵＡＮ Ｚｈｅｎｇ－ｙｉｎｇ１，ＤＥＮＧ Ｊｕｎ－ｈｕａ１， 　　ＧＵＯ Ｒｕｉ１，ＹＵＡＮ Ｆａｎｇ－ｙａｎ１，ＸＵ Ｄｉ－ｐｉｎｇ１，ＴＩＡＮ Ｙｏｎｇ－ｘｉａｎｇ１ 　　（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Hｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Vｅｔｅｒｉｎａｒｙ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ； 　　２． Ｈｕｂｅｉ Kｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， ???ｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ－ｍＰｏＩＦＮ－γ， ｔｈｅ ｍａｔｕｒｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｐｏｒｃｉｎｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ （ｍＰｏＩＦＮ－γ） ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗｈｉｃｈ was ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｆ ＣｏｎＡ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ｌａｎｄｒａｃｅ ｓｗｉｎｅ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｂｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＥＴ－２８ａ ｖｅｃｔｏｒ． Ａｆｔｅｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＰＣＲ， ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ， ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３） ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｅｄ ｂｙ ＩＰＴＧ． Ｔｈｅ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ ｗａｓ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ２０．５ｋＤａ，was existed mainly in inclusion body． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｒｅｎａｔｕｒａｌｉｚｅｄ ｆｒｏｍ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ＰｏＩＦＮ－γ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｓｔａｎｄａｒｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｈ－ＰＲＲＳＶ／Ｍａｒｃ－１４５ （ｖｉｒｕｓ／ｃｅｌｌ） ｔｅｓｔ ｓｙｓｔｅｍ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｉｔｅｒ ｏｆ ＰｏＩＦＮ－γ ａｇａｉｎｓｔ Ｈ－ＰＲＲＳＶ ｗａｓ ７．６８×１０３ Ｕ／ｍｇ． Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｌａｉｄ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔ