玫瑰冠鸡IGF-I基因多态性与体重及屠体性状关系研究.docVIP

玫瑰冠鸡IGF-I基因多态性与体重及屠体性状关系研究 　　摘要采用PCR-RFLP技术，对100只玫瑰冠鸡的胰岛素样生长因子一I（IGF-I）基因的5′端调控区进行遗传多态性研究，该调控区的扩增产物经PstI酶切后出现 “-/-”“+/-”“+/+”3种基因型，其基因型频率分别是0.22、0.36和0.42。经x2检验，玫瑰冠鸡在IGF-I位点上处于哈代－温伯格平衡状态（P＞0.05）。分析基因型与12周龄体重和部分屠体性状时发现：玫瑰冠鸡在12周龄体重、半净膛重和胸肌重上都存在“-/-”＞“+/-”＞“+/+”的趋势，且在半净膛重和胸肌重上，“-/-”型和“+/-”个体显著高于“+/+”型个体（P＜0.05）；在12周龄体重上，“-/-”型显著高于“+/+”型个体（P＜0.05）。 　　关键词玫瑰冠鸡；胰岛素样生长因子-I；体重；屠体性状；PCR-RFLP 　　 　　巨型玫瑰冠鸡是我国古老的地方鸡种之一，其红色桑椹状的冠形恰似新疆天山上的雪莲，鲜艳夺目，并具有耐粗饲、抗寒耐暑以及抗病力强等优良生物学特性。现有的2 000多只玫瑰冠土鸡具有肉味鲜美、香气浓郁、细嫩可口等优良品质，这是我国乃至世界上宝贵的家禽种质资源和育种素材[1]。 　　在体重、屠体性状上，王金玉等[2]、Haberfeld等[3]、Lament等[4]用DNA指纹技术做过研究。颜炳学等[5]、欧阳建华等[6]分别对IGF-Ⅱ基因和IGF-I基因进行了多态性检测，表明基因与生长、屠体性状有关。孟和等[7]、赵建国等[8]和顾志良等[9] 分别对PPAR-a基因、解偶联蛋白基因和瘦蛋白受体（OBR）基因进行了单核苷酸多态性研究。 　　Baker等[10]、Siddiqui等[11]、Goddard等[12]、Scanes等[13]和Kang等[14]研究了IGF-I浓度和经济性状之间的关系。Nagaraja等对采食量、体重、产蛋量和蛋重与IGF-I多态性进行了研究，并指出了IGF-I基因型可用于选择[15]。但迄今，少有把IGF-I基因作为候选基因研究与屠体性状关系的报道。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1试验鸡选择和饲养 　　试验鸡选自石河子152团玫瑰冠鸡保种群，根据系谱从每家系随机选3～4只，共100只，单独组群，以扩大试验群的遗传基础，提高其代表性。试验鸡统一饲养于玫瑰冠鸡保种场，采用厚垫料饲养方式，免疫程序和饲养管理按一般管理方法进行，尽可能保证受试鸡???饲养管理条件相同。分0～3周、4～8周和8～12周三阶段饲养，所用颗粒料均购自天康饲料有限公司。 　　 　　1.2DNA多态性分析 　　1.2.1基因组DNA提取。翅静脉采血0.3mL放入1×STE 470μL、10%SDS 25μL，加入浓度为0.1mg/mL的Proteinase k 5.25μL，55℃水浴过夜，充分消化蛋白质和RNA；加入等体积的饱和酚（约550μL），轻摇10min，离心（12 000rmp）15 min，吸取含DNA的上清液；加入500μL苯酚、氯仿、异戊醇（25∶24∶1）混合液，轻摇10min，离心（12 000rmp）15min，吸取含DNA的上清液，用氯仿、异戊醇（24∶1）再抽提1次，加入1/10体积的NH4AC（约60μL），混匀，再加入2倍体积的预冷无水乙醇，轻轻混匀，可见絮状沉淀，4℃沉淀1h，离心（10 000rmp）10min后弃去上清液。将沉淀放置20～30min，使乙醇挥发干净，然后加入100μL TE于4℃冰箱保存备用。 　　1.2.2引物。所用引物参照Nagaraia等[15]提供的序列，序列如下：Forward 5′-GAC TAT ACAGAAAGAACCCAC-3，Reverse 5′-TATCACTCAAGTGGCTCAAGT-3′。引物由上海生物工程有限公司合成。 　　1.2.3PCR扩增。采用25μL反应体系，10xBufer 2.5μL，MgCl2（25mmoL/L）1μL，dNTPs（2.5mmoL/L）1.5μL，前后引物（5pmoL/L）各1μL，DNATaq聚合酶（5U/μL）0.5μL，模板DNA 1μL，去离子水16.5μL。PCR反应循环参数为：94℃预变性5min，94℃变性60s，56℃退火120s，72℃延伸90s，共34个循环，最后72℃延伸8min，4℃保存。PCR扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭（EB）染色后检测扩增结果。 　　1.2.4酶切鉴定。取PCR产物12μL，PstI酶（10U/μL）1.5μL，10xBufer 1.5μL，加双蒸水至20μL，37℃酶切过夜，酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，凝胶成像分析系统拍照检测基因分型。