篦子三尖杉内生真菌gyzy-9鉴定及其抑菌活性研究.docVIP

篦子三尖杉内生真菌gyzy-9鉴定及其抑菌活性研究 　　摘要：为研究濒危药用植物篦子三尖杉（Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｏｌｉｖｅｒｉ Ｍａｓｔ）内生真菌ｇｙｚｙ－９的发酵产物及其抑菌活性，对其发酵产物进行了ＨＰＬＣ分析，并对其抑菌活性进行了纸片法检测，同时还对菌株ｇｙｚｙ－９的ＩＴＳ序列进行了聚类分析。ＨＰＬＣ分析结果表明，菌株ｇｙｚｙ－９能够产生高三尖杉酯碱（Ｈｏｍｏｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ），其发酵液对表皮葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、提取物对枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）的抑菌效果较强，抑菌圈直径均大于１５ ｍｍ。对ｇｙｚｙ－９菌株ＩＴＳ序列的系统发育聚类分析结果表明，ｇｙｚｙ－９为平革菌属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｓｐ．）真菌。对此菌株的研究为进一步研发生产三尖杉药用活性成分提供了条件。 　　关键词：篦子三尖杉；内生真菌；高三尖杉酯碱；高效液相色谱 　　中图分类号：Ｒ９３；Ｑ９３９．９３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2449-04 　　 　　Identification and Antimicrobial Activity Analysis of Endophytic Fungi Strain 　　gyzy-9 from Cephalotaxus oliveri 　　 　　ＨＡＮ Ｊｉｅ１，ＺＨＡＯ Ｊｉｅ－ｈｏｎｇ２ 　　（１． Ｌａｂ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２，Ｃｈｉｎａ； 　　２． Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００８１，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔ the ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｓｔｒａｉｎ ｇｙｚｙ－９ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｏｌｉｖｅｒｉ Ｍａｓｔ， ａ ｒａｒｅ ａｎｄ ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ ｍ???ｄｉｃｉｎｅ ｐｌａｎｔ， ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ） ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｇｙｚｙ－９ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ， ｐａｐｅｒ ｄｉｓｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＨＰＬＣ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇｙｚｙ－９ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ｈｏｍｏｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ． Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ， ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｆｅｒｍｅｎｔ ｂｒｏｔｈ ａｎｄ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｐｅｌｌｅｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ ｏｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ was ｓｔｒｏｎｇｅｒ as ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ was wider ｔｈａｎ １５ ｍｍ． Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｇｙｚｙ－９ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｓｐ． ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｒａｉｔｓ ａｎｄ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｌｕｓｔｅｒ． Ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ waｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｏｆｆｉｃｉｎａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｏｌｉｖｅｒｉ Ｍａｓｔ； endophytic fungus； homoharringtonine； HPLC 　　 　　植物内生菌是一种多样性十分丰富的微生物类群，生活在健康植物组织内部，与宿主植物长期协同进化，在与宿主植物长期共存的过程中，能形成产生与宿主植物相同或相似生物活性物质的能力。药用植物内生真菌活性成分的研究，如小檗碱［１］、紫杉醇［２］、细胞松弛素［３］、鬼臼毒素［４］、长春新碱［５］、喜树碱［６］等已有相关报道。 　　三尖杉属植物（Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｓｐｐ．）为珍稀药用植物，其种子和枝叶是生产抗白血病药物三尖杉酯碱（ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎ，Ｈ