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紫球藻抗菌蛋白纯化及其部分性质研究 　　摘要：紫球藻提取液经硫酸铵沉淀、ＨＡ柱层析后分离纯化出１种抗菌蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，2个亚基的相对分子量为２１.0 ｋＤ与３０.0 ｋＤ；此抗菌蛋白对热敏感，氨基酸组成分析显示含有１７种氨基酸，含量较高的是谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸。纯化的蛋白对产黄青霉有较强抑制作用，其抗真菌活性比抗细菌活性强。 　　关键词：紫球藻；抗菌蛋白；纯化；性质 　　中图分类号：Ｑ９４９．２９＋２．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）08－~1587-03 　　 　　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Some Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ 　　Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ 　　 　　ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ－ｑｉｎｇ１，ＺＨＥＮＧ Ｙｉ２，ＬＩＮ Ｘｉｏｎｇ－ｐｉｎｇ３ 　　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ ３６３０００，Ｆｕｊｉａｎ，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｆｕｊｉａｎ Ｈｉｇｈｅｒ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｎｅｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｉｔｙ， Ｆｕｚｈｏｕ ３５0108，Ｃｈｉｎａ； ３． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｎｉｎｇｄｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｎｉｎｇｄｅ ３５２１００， Ｆｕｊｉａｎ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ ｂｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｎ ＨＡ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｐｐｅａｒｅｄ ｔｗｏ ｂａｎｄｓ ｗｉｔｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ２１ｋＤ ａｎｄ ３０ｋＤ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｈａｎｇｅ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｓｅｖｅｎｔｅｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄs， ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｇｌｕ， Ｇｌｙ ａｎｄ Ａｓｐ ｗａｓ ｈｉｇｈ respectively． Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ． Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ； ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ； ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ； ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 　　 　　植物含有丰富的抗菌蛋白，有数百种之多，如萝卜［１］、尾穗苋［２］、银杏［３］和葫芦种子［４］中的抗菌蛋白以及几丁质酶、葡聚糖酶、蛋白酶抑制剂、核糖体失活蛋白等［５］，它们都有不同程度的抑菌作用。Ｍｅｌｏ等［６］报道沙菜（红藻类）的粗蛋白具有抗真菌作用及从墨角藻中提取的类凝集素能抑制大肠杆菌和脑膜炎双球菌生长；陈国强等［７］研究发现，３种大型海藻的粗蛋白对６种植物病原真菌的菌丝生长及孢子萌发具有不同程度的抑制效果，但目前对微藻抗菌蛋白的研究报道较少。 　　紫球藻（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ）是一种比较原始的单细胞红藻，具有独特的物理特征，在生长过程中能合成多种有较高经济价值的生物活性物质。前期的研究发现紫球藻的蛋白质提取物具有抗菌活性［８］。本试验对此抗菌蛋白进行了分离纯化，并测定了其部分性质，为进一步开展微藻资源的研究提供参考。 　　１材料和方法 　　１．１材料 　　试验藻种为紫球藻，引自中国科学院水生生物研究所，以ＫＯＣＨ培养基进行振荡培养，培养光照强度为３ ０００ μｍｏｌ／（ｍ２?ｓ），光周期为１２ ｈ光照／１２ ｈ黑暗，培养温度为２５～３０℃，取对数期（培养１０ ｄ后）的培养物，离心洗涤，收