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纤维素降解菌筛选及酶活力测定 　　摘要：从延安市宝塔区杨家湾长期堆积牛粪和秸秆的腐殖土中筛选到１７株纤维素降解菌，经刚果红培养基、赫奇逊培养基复筛，得到ＴＣ－２、ＴＣ－４、ＴＣ－５、ＴＣ－６、ＴＣ－８、ＴＣ－１１、ＴＣ－１２、ＴＣ－１３共８株可分解纤维素的菌株，对其进行纤维素酶活力（CMCA）和滤纸酶活力（FPA）的测定。结果表明，菌株ＴＣ－１１产生的两种酶的酶活力均较高，可作为进一步研究的试验菌株。 　　关键词：纤维素；降解菌；纤维素酶活力；滤纸酶活力 　　中图分类号：Ｑ９３－３３１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）15－3072-02 　　 　　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ Ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ Ｅｍｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 　　 　　ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ｐｅｎｇ，ＹＡＮＧ Ｈａｎ，ＹＵＡＮ Ｍａｏ－ｌｉｎ，ＨＥ Ｘｉａｏ－ｌｏｎｇ，ＲＥＮ Ｇｕｉ－ｍｅｉ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｙａｎ’ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｙａｎ’ａｎ ７１６０００， Ｓｈａａｎｘｉ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｓｅｖｅｎｔｅｅｎ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｄｅｇｒａｄｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ｓｔａｃｋｅｄ ｃｏｗ ｄｕｎｇ ａｎｄ ｓｔｒａｗ ｆｏｒ ａ ｌｏｎｇ ｔｉｍｅ， ａｎｄ ｅｉｇｈｔ ｓｔｒａｉｎｓ （ＴＣ－２， ＴＣ－４， ＴＣ－５， ＴＣ－６， ＴＣ－８， ＴＣ－１１， ＴＣ－１２， ＴＣ－１３） ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ by Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ＨａｏＱｉＸｕｎ ｍｅｄｉｕｍ． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｎｄ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒｌｙａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｎｄ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒｌｙａｓｅ ｏｆ ＴＣ－１１ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ １．０ ＩＵ indicating ｔｈａｔ ＴＣ－１１ ｗａｓ ａ ｖａｌｕａｂｌｅ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ worth ｔｏ ｂｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ； ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ sｔｒａｉｎ； ＣＭＣＡ； ＦＰＡ 　　进入２１世纪以来，能源危机问题日趋严重。而大量的植物秸秆的主要成分――纤维素经过处理后可通过微生物发酵生产燃料、饲料、肥料等，取代目前由化工燃料合成生产的部分有机产品［１－３］。 　　纤维素的微生物降解已经取得了一定的成果［４－８］，但由于目前筛选得到的大多数纤维素降解菌产生的纤维素酶活力（CMCA）低下，成为制约该技术推广应用的重要原因之一。因此，筛选产生高活性纤维素酶的菌株有着重要的意义。本研究从陕北地区堆积秸秆和牛粪的土壤中筛选出可高效降解纤维素的菌株，对其进行酶活力测定，以期为解决秸秆转化醇类及菌肥的制造奠定科学基础。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１供试土样采自延安市宝塔区杨家湾长期堆积牛粪和秸秆的腐殖土。 　　１．１．２药品羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）、溴百里蓝、刚果红、3，5-二硝基水杨酸（ＤＮＳ）试剂，均为分析纯。 　　１．１．３仪器隔水式电热恒温培养箱（ＰＹＸ－ＤＨＳ－４０*５０－ＢＳ，上海跃进医疗器械厂）、紫外分光光度计（ＵＶ－１２４０，日本岛津）、立式压力蒸汽灭菌锅（ＬＳ－Ｂ５０Ｌ，江阴滨江医疗仪器厂）、气浴式振荡器（ＺＪＳ－１３２０，科大创新股份有限公司中佳分公司）。 　　１．１．４培养基ＰＤＡ培养基、ＬＢ培养基、ＣＭＣ培养基［９］、刚果红培养基［１０］、赫奇逊培养基［１１］、产酶培养基［９］。 　　１．２方法 　　１．２．１纤维素降解菌的筛选①富集：将土样加到ＰＤＡ液体培养基中，３０ ℃、１２０ ｒ／ｍｉｎ，培养３ ｄ后取培养液以体积为５％的接种量接入ＰＤＡ液体培养基中，重复３次。②初筛：取０．５ ｍＬ富集液加入到ＣＭＣ培养基中，３０ ℃、１２０ ｒ／ｍｉｎ，培养３ ｄ后划线分离，将得到的菌株转接在ＬＢ斜面上，４ ℃冰箱中保存备用。③复筛：将初筛的菌株接种到ＣＭＣ培养基上，选出长势较好的菌株接种于刚果红培养基上，选择透明圈大且清晰的菌株，接入经处理过的滤纸条［１２］的赫奇逊液体培养基中，２８ ℃、培养４ ｄ后，根据滤纸的裂解程度，选出引起滤纸裂解效果较好的菌株作为下一步的试验菌株。 　　１．２．２酶活力的测定①粗酶液的制备。取试验菌株培养液，以体