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袋花忍冬总黄酮提取工艺优化 　　摘要：采用Ｌ９（３４）正交试验设计，以袋花忍冬总黄酮含量为考察指标，考察了乙醇体积分数、提取时间、乙醇用量、提取次数４个因素对提取量的影响。结果表明，袋花忍冬最佳提取工艺为１０倍量７０％乙醇提取两次，提取时间１ ｈ。该工艺经重现性好，对进一步的工艺开发有较好的参考价值。 　　关键词：袋花忍冬；总黄酮；正交试验；提取工艺 　　中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）08－1669-02 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｎｉｃｅｒａ sａｃｃａｔａ 　　 　　ＤＡＩ Ｘｉａｎ－ｐｉｎｇ 　　（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｂｉｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｙａｎｔａｉ ２６４００３， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ． ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４）． Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｒｅｆｌｕｘ ｄｕｒａｔｉｏｎ， ｅｔｈａｎｏｌ ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ． Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ １０－ｆｏｌｄ ７０％ ｅｔｈａｎｏｌ， １ ｈ ｏｆ ｒｅｆｌｕｘ， ａｎｄ ２ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ， ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｎｄ ｗｏｒｔｈｙ ａ ｔｒｉａｌ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ.； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ； ｏｒｔｈｏ??ｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 　　 　　袋花忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ.）为忍冬科忍冬属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ Ｌｉｎｎ）植物，落叶灌木，广泛分布于我国陕西、甘肃、青海、四川、重庆、贵州、云南及西藏等地［１］。其主要活性成分为黄酮类化合物［２，３］，具有抑菌、抗病毒、消炎、降低血压、抗癌、调节免疫等作用［４，５］。长期以来对袋花忍冬黄酮类化合物的提取研究甚少，而采用正交试验对袋花忍冬进行黄酮类化合物提取的研究尚未见报道。因此通过对袋花忍冬总黄酮成分提取工艺的研究，旨在为进一步合理开发袋花忍冬提供参考依据。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　袋花忍冬采自重庆奉节县，由滨洲医学院药学院天然药物化学研究室鉴定为忍冬科忍冬属植物袋花忍冬的干燥全草，芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供，其他试剂均为分析纯。 　　ＴＵ－１９０１双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），ＲＥ－２０００Ａ旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），ＡＬ１０４电子天平（梅特勒－ 托利多仪器有限公司），Ｂ－２２０型恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂），ＤＺＦ２６０２１型真空干燥箱（上海精密实验设备有限公司）。 　　１．２方法 　　１．２．１提取溶剂的选择 　　１）水提取法。精密称取袋花忍冬５ ｇ，加水５０ ｍＬ浸泡３０ ｍｉｎ后，在水浴中加热回流提取１ ｈ，趁热过滤，共提取２次，合并滤液至２００ ｍＬ容量瓶中，药渣用水洗涤２～３次，一并纳入滤液，冷却后用水定容，摇匀，待用。 　　２）乙醇提取法。精密称取袋花忍冬５ ｇ，加乙醇５０ ｍＬ浸泡３０ ｍｉｎ后，水浴回流１ ｈ，趁热过滤，共提取２次，合并滤液至２００ ｍＬ容量瓶中，药渣用乙醇洗涤２～３次，一并纳入滤液，冷却后乙醇定容，摇匀，待用。 　　１．２．２正交试验选用乙醇体积分数、提取时间、乙醇用量及提取次数４个因素，每个因素设３个水平，以袋花忍冬中总黄酮提取量为考察指标，按Ｌ９（３４）正交试验表进行试验，因素与水平设计见表１。 　　 　　１．２．３总黄酮含量测定 　　１）标准曲线的制备。精密称取在１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品５０ ｍｇ，置５０ ｍＬ容量瓶中，加乙醇约３０ ｍＬ，置水浴中微热使溶解，冷却后加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取１０ ｍＬ，置１００ ｍＬ容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每毫升含芦丁对照品０．１ ｍｇ） 。精密量取对照品溶液０、１．００、２