龙眼水通道蛋白基因(DLPIP1)克隆与表达分析.docVIP

龙眼水通道蛋白基因(DLPIP1)克隆与表达分析 　　摘 要： 应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时，发现PIP1 蛋白在龙眼低温胁迫中上调表达。应用RACE 技术克隆龙眼水通道蛋白基因全长cDNA，命名为DLPIP1，基因登陆号为JN572691，长度为1 132 bp，包括1个900 bp的开放阅读框，编码299 个氨基酸序列，同源性分析表明，DLPIP1 在21 个不同植物中的一致性为90%~93%。应用生物信息学软件对DLPIP1 氨基酸序列分析表明，含有7 个跨膜区，有2 个NPA 单元，其氨基酸残基与MIP 家族蛋白保守区序列完全一致。氨基酸序列比对发现，该序列与其他物种PIP 质膜水通道蛋白氨基酸序列有很高的同源性。利用实时荧光定量技术对DLPIP1 在低温胁迫下不同组织表达谱分析表明， DLPIP1 在龙眼根、茎、叶中都有表达，在根中的表达量最高，其次是茎和叶。DLPIP1 在低温胁迫时，随着低温胁迫时间的延长而发生变化。这说明DLPIP1 蛋白在龙眼低温逆境过程中起作用。 　　关键词：龙眼； 水通道蛋白； 低温胁迫； 克隆； 表达 　　中图分类号：Ｓ６６7．2 文献标志码：Ａ 文章编号：１００９－９９８０（２０12）０2－0225－０6 　　 　　Cloning and expression of longan aquaporin （DLPIP1）gene 　　CHEN Hu1， HE Xin-hua1，2*， LUO Cong1， DENG Li-bao1， HU Ying1， LI Ming-juan1， YANG Li-tao1，3 　　（1College of Agriculture， Guangxi University， Nanning，Guangxi 530004 China； 2Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Lab， Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning，Guangxi 530007 China； 3State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources， Guangxi University， Nanning，Guangxi 530004 China） 　　Abstract: The protein expressions under low temperature stress were studied using proteomics method．The results showed that the expression of DLPIP1 protein was up-regulated. The full length of DLPIP1 cDNA obtained by RT-PCR was 1 132 bp with a 900 bp open read frame which encoded a putative DLPIP1 protein with 299 amino acids. Comparison of the amino acid sequence homology among DLPIP1 proteins from 21 different species indicated that DLPIP1 protein had a range of 90% to 93% identity with homologues of other plants. Bioinformatics analysis demonstrated that DLPIP1 exhibited a typical structure with seven membrane-spanning domains and an internal symmetry showing two highly conserved NPA motifs and possessing the MIP family signal consensus sequence. The DLPIP1 amino acids showed high identity with the PIP plasmalemma subfamily of other 21 plant species by homology comparison analysis. Quantitative real-time PCR results showed that