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绿僵菌的研究进展 2005年4月 Apr.2005 热带农业科学 CHINESEJOURNALOFTROPICALAGRICULTURE 第25卷第2期 Vo1.25,No.2 绿僵菌的研究进展① 代鹏②宋妍许天委谢玉平黄俊生③ (中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737) 摘要综述了近年来国内外对绿僵菌属的分类,绿僵菌入侵寄主过程中的相关基因的研究,剂型开发等方面 的概况. 关键词绿僵菌;分类现状;相关基因;剂型开发 分类号$432.44;Q949.32;Q78 AdvancesofResearchonMetarhiziumspp. DAIPengSONGYanXUTianweiXIEYupingHUANGJunsheng (EnviromentandPlantProtectionInstitute,CATAS,Danzhou,Hainan571737) AbstractThearticlesummarizestheresearchonclassingstatusofMetarhiziumspp.,correlation geneinthebreakinginsectandthepreparationofMetarhiziumanisopliaeinrecentyears. KeywordsMetarhiziumspp;classifyingstatus;correlationgene;preparation 真菌生防制剂具有触杀性,流行性,对环境安 全和不易产生抗药性等特点.70%的昆虫真菌性病 害,在害虫控制方面有巨大的潜力.对绿僵菌 [Metarhiziumanisopliae(Metarhiziumspp.),Ma]的 研究已有100多a的历史,但由于在发酵方法,剂 型开发及环境制约等方面存在各种各样的问题,导 致其防治效果不稳定,影响了其大规模的应用.直 到1988年,金龟子绿僵菌制剂应用于澳洲甘蔗和 牧草害虫的防治,其应用才算取得较大进展.应用 绿僵菌防治地下害虫及非洲蝗虫也已取得初步成 效,绿僵菌的研究和应用成了生物防治领域的一个 热点. 1绿僵菌属的系统分类现状 11绿僵菌属的分类地位 自从1879年MeqHHKOB首先大量繁殖绿僵菌 防治奥地利丽金龟(,4nisopliaaustriacaHerbst)以 来,绿僵菌就成为了害虫微生物防治的主角之一. 绿僵菌属(MetarhiziumSorokin)是Soroki13于1883 年建立的,它隶属于真菌门(Eumycota),子囊菌亚 门(Ascomycotina),核菌纲(Pyren—mycetes),球壳 菌目(Sphaeriales),麦角菌科(Clavisipitetaceae). 自Sorokin建立绿僵菌属以来,先后发表10余个 种.由于不同作者采用的标准不统一,故分类状况 比较混乱.目前国际上被广泛接受的分类观点是 Tulloch建立的,他将绿僵菌属定为2个种,即金 龟子绿僵菌和黄绿绿僵菌,金龟子绿僵菌包括小孢 变种和大孢变种…. 利用传统的分类方法很难区分绿僵菌属内各 种群间的差异,而野生型菌株的遗传特性则提供了 菌株间的遗传差异.现有资料表明,利用可溶性蛋 白图谱能区分形态学上相似的种;酯酶同工酶区 分绿僵菌突变株也明显表现出多态性,这可能与其 遗传变异因子及环境因素有密切的关系.另外,分 子标记方法用于绿僵菌的鉴定,分类,进化和其它 各方面信息的研究,是当前和今后受重视的领域. ①收稿日期:2004—12—30 责任编辑/凌青根/E-mail:rdnk@ ②代鹏(1978～),男,硕士,助理研究员.E-mai1:dapen008~163.tom. ③通讯作者. 一 73— 2005年4月热带农业科学第25卷第2期 近年来,在DNA水平上研究遗传差异的技术早已被 认可,并且已经成为研究虫生真菌群落遗传结构的 有效方法. 1.2绿僵菌属种间分类方法的应用 限制性片段长度多态性(RFLP)和聚合酶链式反 应(PCR)技术基础上的DNA随机扩增多态性RAPD方 法,为研究绿僵菌的分类鉴定,系统发育,种内分 型和地理型分布,及其生态学和流行学,提供了重 要的检验手段.rDNA基因在进化中的高保守性和 相关间隔区的多变性,使其成为研究分子系统中的 最重要和应用最为广泛的工具之一.目前这项技 术已广泛应用于绿僵菌的研究r2]. Leal等用巢式PCR技术,将对不同地理来源 和分离自不同寄主或土壤的40株绿僵菌菌株蛋白 酶Prl基因扩增出来,然后用3种限制性内切酶 (DdeI,HpaII和RsaI)消化扩增产物.酶切图谱共有 15种类型,经聚类分析分为4组.在部分组的菌 株间,其限制性酶切片断图谱和地理来源有一定的 相关性[3].Fege