藻类毒性试验 水环境保护课件宣讲培训.ppt

第三章 藻类毒性试验 第七章 藻类毒性试验 基本内容 (一) 试验方法： 静止试验：完全不换水 半静止试验：至少每24h换水一次，对不稳定易挥发的样品每h或六h换水一次更好。 藻类急性毒性试验定为96h(4d) 一 仪器 (一) 仪器 1、 显微镜 2、?分光光度计（波长400－750nm） 3、 酸度计，0－14PH单位，准确度 ±0.1pH单位。 4、? 照度计 5、??0.1ml浮游植物计数框或血球计数板 6、??台式离心机4000转／分 容器的清洗 1 、 玻璃器皿用洗剂刷洗 2 、用自来水冲洗5次 3 、水滤干后置10%的盐酸溶液中浸泡过夜 4 、再用自来水反复冲洗干净 5 、然后用蒸馏水洗 3次 6 、 在105℃条件下烘干。 7 、培养用的玻璃器皿在使用前经1.5磅 (1.1kg/ 　cm2)、121℃，高压灭菌15分钟，160-　　　180℃干热消毒2小时, 8 、灭菌后,随后用培养基荡洗,倒立在吸水纸 　上20-30分钟至干。 (三) 培养基制备—水生4号培养基 硫酸铵(NH4)2SO4 　　 0.20g 过磷酸钙Ca(H2PO4)2·H2O+(CaSO4·H2O) 　 0.030g 硫酸镁MgSO4·7H2O 0.080g 碳酸氢钠NaHCO３ 0.100g 氯化钾KCL 　 0.023 三化铁FeCl3　　　　 0.150ml 土壤浸出液 　 0.5ml 蒸馏水 　 1000ml 1 、按每种营养，分别配成1000倍贮备液。 2 、每种贮备液各取1mL加到蒸馏水中， 最终体积为1升。 3 、 必须注意，每加一种贮备液后应充分摇匀后，再加入另一种贮备液。 配 制 步 骤 4 、土壤浸出液配制:用田土和水1：1混合，摇匀,静置24小时，取上清液过滤，除去未能自然沉降的胶状物。 5 、过滤液经高压灭菌20分钟，贮存备用,使用期一年。 配 制 步 骤 现 用 培 养 基 NH4NO３ 0.2g KH2PO4 0.1g CaCL2 0.1g MgSO4 0.1g FeCL3 痕量 A5 1mg 水 1L (四) 试验藻种 蛋白核小球藻 Chlorella pyrenoidosa 铜锈微囊藻 Microcystis aeruginosa 水华鱼腥藻 Anabaena flos-apuae 小球藻 Cyclotella sp 菱形藻 Nitzschia sp 羊角月芽藻 Selenastrum capri cornutum 普通小球藻 Chlorella vulgaris 斜生栅藻 Scenedemus obliqus 1 、上述藻种可以从备有藻种的有关单位索取; 2 、也可以从邻近的水体采取; 3 、必须先经分离与纯化; 4 、获得纯种，用于毒性试验. 备注： 二 试验处理 藻种预培养 1、将试验藻种经无菌操作移种到盛有培养基的容器内; 2、在所需温度和光强下，通气或振荡培养; 3 、96小时移种一次，反复2－3次; 4 、使藻类达到同步生长阶段,保持纯种。 三 毒性预备试验 目的在于探明毒物对藻类的半数有效浓度(EC50)的范围; 为正式试验打基础; 其处理浓度的间距可大一些，以尽可能卡住EC50值。 预 试 验 浓度 活动的大型溞 90 0 35 0 10 0 3.5 0 1 0 0.35 5 0.035