血浆脂蛋白琼脂糖电泳课件教材课程.ppt

1 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 【目的】 掌握脂蛋白的分类及其代谢特点。 掌握脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其方法 。 2 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。 D-半乳糖 3,6-脱水-L-半乳糖 琼脂糖（agarose） 【原理】 3 4 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。 【原理】 5 血清脂蛋白(lipoprotein)的组成 8 （三）结 构 特 征 CM VLDL (前β) LDL (β） HDL （α） 甘油三脂 胆固醇 蛋白质 带电量（Q）pH8.6为例 颗粒大小（mm） 密度 电泳速度 形态 多 多 少 少 大 低 慢 规则 不规则 少 少 多 多 小 高 快 9 pH 8.6 pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。 加样槽 β 前 β α CM LDL VLDL HDL — + 10 【试剂与器材】 1.人血清（预染） 2.微量加样器 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 5.巴比妥缓冲液（pH8.6） 11 【操作】 血清预染 制胶 12 1 2 3 4 40mL 点样孔朝负极 – + 去封口胶布 13 血清预染 制胶 点样 3 倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。 14 血清预染 制胶 点样 预染色的标本（15μL） 3 倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。 小心！！！点样孔不要戳破 15 血清预染 制胶 点样 电泳 80－100V， 20－30min, 负极向正极 16 17 制胶时，要注意梳子的低部要距制胶板1mm以上。 (2) 凝胶冷却时要水平放置，完全凝固后才能使用。 (3) 点样时要小心，不要戳穿点样孔。 (4) 点加样品时，要缓缓加入，不能太快，否则样品容易外溢。 (5) 样品点于电泳槽负极。 (6) 吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣。 操作注意事项： 18 19 临床应用：高脂蛋白血症的分型 CM β 前β α 正常 Ⅰ型 Ⅱa型 Ⅱb型 Ⅲ型 Ⅳ型 Ⅴ型 20 思 考 题 1. 影响电泳迁移率的因素有哪些？ 2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。