新型m细胞靶向性疫苗预防病毒性心肌炎的作用分析-analysis of the effect of new m cell targeted vaccine in preventing viral myocarditis.docx

新型 M 细胞靶向性疫苗预防病毒性心肌炎的作用研究中文摘要6）以 5LD50CVB3 病毒攻击后，观察 28 天小鼠存活情况，发现 chi-CPE30-pVP1滴鼻免疫组 42%小鼠实现了长期存活；与对照组相比有明显差异。三、评估 25μg 口服免疫诱生的 CVB3 特异性免疫应答及免疫保护以 chi-CPE30-pVP1 、chi-pVP1、chi-CPE30-pcDNA3.1 和 chi-pcDNA3.1 四种 疫苗分别于 0、2、4 、6 周口服免疫 BALB/c 小鼠，每次每种质粒 25μg，共 4 次。 检测 CVB3 特异性免疫应答及免疫保护，评估口服免疫效果。我们发现：1）chi-CPE30-pVP1 25μg 口服免疫后，诱生了较高水平的血清 IgG 和黏膜 IgA抗体。2）特异性淋巴细胞增殖实验发现，chi-CPE30-pVP1 显著诱生了脾脏及 MLN部位的 CVB3 特异性淋巴细胞增殖反应。3）ELISPOT 结果显示，与 chi-pVP1 单独免疫组相比，chi-CPE30-pVP1 口服 免疫可显著增加脾脏及 MLN IFN-γ 分泌细胞的数量，有助于抗病毒。4 ）取感染后 7 天的小鼠心脏和胰腺，观 察病理学改变，结果显示： chi-CPE30-pVP1 口服免疫组心脏和胰腺近似于正常，提示口服免疫该疫苗提供了 高效的免疫保护。5 ）以免疫组化检测感染后口服免疫小鼠心肌细胞内病毒，结果显示， chi-CPE30-pVP1 免疫小鼠心肌细胞正 常清 晰，未见有病毒颗粒染色 。提示 chi-CPE30-pVP1 疫苗可诱生更有效的抗病毒免疫应答，从而在 CVB3 攻击后 4 天， 心肌内较好地清除了感染病毒。四、chi-CPE30-pVP1 增强黏膜免疫应答的机制探讨从体外和体内两个方面证明新型黏膜疫苗的靶向递送作用对其增强黏膜免疫 应答和免疫保护具有重要意义。获得如下结果：1) FITC-chi-CPE30-DNA 结合转染 claudin 4 的 293T 细胞的能力更强。2) 体内小肠 M 细胞靶向实验证明 chi-CPE30-DNA M 细胞摄取量明显多于chi-DNA。本研究首先成功构建了新型 M 细胞靶向性黏膜递送系统，然后将 chi-CPE30- pVP1 免疫小鼠，详细观察了滴鼻免疫诱生的 CVB3 特异性全身和黏膜免疫应答及中文摘要 新型 M 细胞靶向性疫苗对病毒性心肌炎预防的研究 免疫保护，并且简单评估及预测了口服 chi-CPE30-pVP1 疫苗能够诱生更强的黏膜 免疫应答，最后在前面研究的基础上探讨了该新型黏膜疫苗发挥免疫效应的潜在 机制。本研究为新型疫苗的分子设计和 CVB3 感染的防治提供了新的免疫手段， 同时可能创建一有助于增强黏膜免疫的技术平台。关键词：CVB3；chi-CPE30-DNA；病毒性心肌炎；M 细胞作者：叶婷指导老师：熊思东教授The study of a novel M-cell targeting vaccine against viral induced myocarditisAbstractThe study of a novel M-cell targeting vaccine against viral myocarditisAbstractCoxsackievirus, especially group B3(CVB3), is the most common pathogen of viral myocarditis. It belongs to the human enterovirus B cluster in the family picornaviridae and is closely associated with acute/chronic myocardial disease and dilated cardiomyopathy cases. Despite the well-characterized molecular structure and its pathological mechanism, no effective prophylactic and therapeutic treatments of viral myocarditis are available. Thus, there is an obvious need to develop a novel and improved vaccine.we previously prepared a novel CVB3-specific mucosal vaccine chitosan-pVP1 (chi-pVP1), which consi