《生物化学精品教学-广西医科》实验考核唾液淀粉酶的最适PH测定.docxVIP

广西医科大学实验报告 2014年12月23日科目 生物化学实验 题目 唾液淀粉酶的最适PH测定 同组同学：何雨豪（201350276）党尉峰（201350275）欧海绸（201350286）李灵姣（201350284）仪器编号 ：实验目的1、 了解pH对酶活力的影响2、 掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法实验原理 pH的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受pH影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。[1]利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的 pH 值即为唾液淀粉酶的最适 pH。实验器材试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml）实验试剂2.5g/L淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水 实验步骤不同PH缓冲液的配制：表一：不同PH缓冲液的配制成分表pH试剂6.06.26.46.66.87.07.20.2mol/L Na2HPO4溶液/ml0.620.931.331.882.453.053.600.2mol/LNaH2PO4 溶液/ml4.384.073.673.122.551.951.40加水稀释至10ml将配好的溶液分别置于已标号的三角瓶中待用唾液的获取：蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却； 解程度，为橙黄色时，为水解完全，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色时表示反应完全，记录所需保温时间。最佳保温时间应在8—12min左右，若偏差太大，应该加以稀释，因此要掌握好唾液淀粉酶的稀释浓度。淀粉用量的确定 表二：淀粉用量的确定 用量（ml） 试管试剂123空白7.0pH缓冲液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.10.20.3-唾液（稀释10倍）0.10.10.10.1混匀，37°C水浴7.5min，然后每管加两滴碘液蒸馏水5.95.85.76混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量4、酶液稀释倍数的确定： 表三：酶液的稀释配制稀释倍数51015202530酶液（ml）10.50.40.250.20.2H2O（ml）44.55.64.754.85.8另取试管各取配好的稀释液0.1ml： 表四：最适酶液稀释倍数的确定管号1234567稀释倍数51015202530空白7.0缓冲液（ml）0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉由第三步操作确定唾液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液蒸馏水（ml）6666666混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数5、测定唾液淀粉酶的最适PH：表五：测定唾液淀粉酶最适PH所加试剂表管号1234567 pH 6.06.26.46.66.87.07.2pH缓冲溶液（3ml）0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉（ml）0.30.30.30.30.30.30.3酶液（ml）0.10.10.10.10.10.10.137℃ 恒温水浴7.5min碘液2滴加入5ml蒸馏水吸光度A660nm注意事项1、 摸准保温时间是实验的关键，用滴管取保温液前后，均应将试管内的溶液混匀，取出保温液后，滴管仍放回试管中一起保温，以减少实验误差。2、碘液不要过早的加到白瓷板上，以免碘液挥发，影响显色效果。3、加入碘液后，立即摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，才能得到理想效果。4、依照分子量算所需溶质质量的时候因结晶水的不同应按试剂瓶标签上的计算。生化实验报告