《生物化学精品教学-广西医科》唾液淀粉酶最适PH值测定论文.docVIP

唾液淀粉酶最适ph值的实验测定论文 摘要：了解唾液淀粉酶的最适ph，把酶学知识应用于临床诊断与应用治疗。本实验目的掌握精测唾液淀粉酶最适pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722分光光度计的使用。通过测定碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应后的吸光度，测出唾液淀粉酶的最适PH值，约为6.2。 关键词：淀粉酶 ph 吸光度 前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。 影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。 PH值对酶反应活力的影响： 1、 酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。 2、 酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。 3、 酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。 4、 酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。 由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。 实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。[1]利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。A在ph值6.0~8.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.2左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.2。 实验仪器与试剂： 试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、v-1110D可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml） 试剂药品：0.4g/L缓冲淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液———————————————————————————————————————————— 试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 ———————————————————————————————————————————— 磷酸氢二钠 0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735 磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.65 0.425 0.265 ———————————————————————————————————————————— 定容到10ml （2）唾液的获取： 蒸馏水漱口1~2次，,然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。 （3）淀粉用量的确定： 管号 1 2 3 空白 7.0PH缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉 0.4 0.5 0.6 - 唾液（稀释10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37?℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液 H2O 5.6 5.5 5.4 6.0 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其中用量 结果： 0.4ml 2.5g/L淀粉为最适量（颜色最浅） （4)酶液稀释倍数的确定： 稀释倍数 5 10 15 20 25 30 酶液