Western blot -蛋白质免疫印迹.pptVIP

分子生物学讨论课 2210130101 刘思远 2210130102 肖泽友 2210130103 江宜铮 2210130104 潘文菊 2210130105 郭诗琪 2210130106 俞晓泉 2210130107 贾玮坤 2210130108 朱勋梅 2210130109 马诗惠 2210130111 李娜 2210130112 张彦斐 生物信息学1301 Western blot（蛋白质免疫印迹）蛋白质双向电泳的原理、方法及在医学中的应用 WESTERN BLOT之歌 ● Western blot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Western blot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。 细胞内基因表达的最终产物是蛋白质，因此检测蛋白质是研究基因表达最常用、最有效的手段之一。 ★ 印迹法（blotting）：是指将样品转移到固相载体上，然后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 采用的是SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测的是蛋白质，“探针”是蛋白质抗体，“显色”用标记的二抗。 western blot名字由来 western blot 发展 生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术，其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。 生物大分子印迹法始创于1975年，内苏格兰爱丁堡大学E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳，把一张硝酸纤维素纸放在凝胶上，利用毛细作用原位凝胶中的DNA八片段转移到硝酸纤维素纸上使之固定化。由于这种技术类似用吸干作品上的墨迹，使吸墨纸染上墨迹而被称为印迹法(blotting)。 1979年，Towbin等人利用电洗脱装置作为印迹动力，首先把Westernblot法用于抗原捡出，并称之为免疫印迹法(immunoblotting)。对应于Southern(DNA分子杂交)、NoHhern(RNA分子杂交)。 1981年Burnette把免疫印迹法称为Western blotting即蛋白质印迹法-Westernblot法。 蛋白质双向电泳的原理 首先根据蛋白质等电点不同在pH梯度胶中等电聚焦(isoelectric focusing，IEF)将其分离，然后按照它们的分子量大小在垂直方向或水平方向进行十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)第二次分离。 双向凝胶电泳常用蛋白质检验方法 蛋白质双向电泳在医学中的应用 の 双向电泳样可用于肿瘤耐药性的研究 ? 双向电泳技术还可用于研究微生物相关蛋白 双向电泳技术是蛋白质组学研究的基础技术平台.应用双向电泳技术分离肿瘤与正常组织细胞之间的差异表达蛋白可为寻找肿瘤的特异标志物、 揭示肿瘤的发病机制以及开发新的肿瘤治疗方式及治疗药物等提供新途径. 双向电泳技术在急性白血病白细胞蛋白质组中的应用提取急性白血病白细胞的蛋白质，建立固相pH梯度双向电泳图谱。初步建立急性白血病白细胞的双向电泳图谱。 双向电泳技术在筛选膀胱癌特异标志蛋白中的应用用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌不同分期的组织,凝胶考马斯亮蓝染色,然后利用GS-800Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,用PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白。 双向电泳样可用于肿瘤耐药性的研究 2210130101 刘思远 2210130102 肖泽友 2210130103 江宜铮 2210130104 潘文菊 2210130105 郭诗琪 2210130106 俞晓泉 2210130107 贾玮坤 2210130108 朱勋梅 2210130109 马诗惠 2210130111 李娜 2210130112 张彦斐 谢谢大家！