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研究结论 α1-AT与NSCLC的肿瘤分期及病理类型有关 治疗前α1-AT敏感组水平明显低于抗拒组，治疗前患者α1-AT基础水平能预测NSCLC放化疗敏感性 ApoA-1在预测NSCLC放化疗敏感性 方面作用较局限 研究结果将刊登在“neoplasms” 致 谢 军事医学科学院蛋白质组中心（国家生物分析中心）王鸿丽、赵永强、李卫华老师对我科研工作的指导和帮助！ 山东省医学科学院基础所崔亚洲老师在蛋白结果分析上对我的指导和帮助！ Thank You! LOGO LOGO 血清蛋白质组学技术筛选NSCLC放化疗敏感性标志物 山东省肿瘤医院放疗科 黄伟 丁秀平 李宝生 第一部分 放化疗敏感性血清标志蛋白的筛选 蛋白质组学与预测标记物 放化疗敏感性的变化不是某一个蛋白发生变化所致，而是组织或细胞内大量蛋白质所形成的复杂网络变化所致，是各因素相互作用引起的。 蛋白质组学(proteomics) 是从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律，实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析。 1. 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 2.电喷雾电离串联质谱 3.表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱 其原理是先进行等电聚焦，蛋白质沿PH梯度分离，到达各自的等电点，随后按分子量把复杂的蛋白质成分分离 巨量生物信息资源的收集、存储、处理、共享、研究和开发。由数据库、计算机网络和应用软件3大部分组成 蛋白组学技术流程 双向凝胶电泳 (2-DE) 质谱技术 (MS) 生物信息 技术 质谱技术 ①基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）：利用基质吸收激光的能量使固相的多肽样品离子化，获得蛋白质的肤质量指纹图（PMF），然后通过相应的数据库有哪些信誉好的足球投注网站，鉴定蛋白质； ②电喷雾质谱（ESI-MS）：在喷射过程中以连续离子化方式使多样品电离； ③表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）:蛋白芯片技术。 ④串联质谱（MS/MS）：用于肤段的氨基酸测序；液相色谱-质谱联用（LC MS/MS） LC-MS/MS联用的优点 因为气相色谱只能分离易挥发且不分解的物质，而液相色谱则把分离范围大大拓宽了，生物大分子也能分离，LC与高选择性、高灵敏度的MS/MS结合，可对复杂样品进行实时分析 LC-MS/ MS没有偏向性，自动化程度高、可重复性好，为发现新的与疾病相关的血清蛋白标记物奠定了基础。 患者资料 16例患者放疗期间给予同步含顺铂双药方案化疗2周期 16例肺癌（腺癌或鳞癌）病人放化疗前的血清 RECIST 评价疗效，分为治疗敏感组和抗拒组，各8例患者，根据病理类型、年龄、性别、化疗方案进行一一配对 *放疗：40Gy后复位行后程加速超分割 ，1.4Gy，bid，至总量 59.6-73.6Gy *化疗：含铂类两药联合同步化疗2周期 患者详细临床资料 蛋白处理 血清收集 去除高丰度蛋白（Aurum Serum Protein Kit） 蛋白提取 蛋白定量 （Bradford 法） 2-DE 用IPGphor IEF System进行一相等电聚焦 将聚焦后的胶条在SDS平衡液中平衡两次 取出胶条在PROTEN II xi Cell上进行垂直SDS第二相分离 分别取两个实验组混合血清各350μl进行电泳，每组实验重复3次。 银染色方法 凝胶图象分析 用Umax PowerLook 1100透射扫描仪扫描凝胶，Imagemaster图像分析软件包对扫描图谱依次进行点检测、背景消减，建立平均凝胶，匹配、量化获取斑点的相关信息等分析 用两组血清蛋白质点数最多的敏感组胶图为参考胶，对六幅胶图进行虚拟重建，再利Imagemaster软件将两张胶图中的斑点进行匹配，匹配不上的斑点视为差异点，选取表达量差异2倍以上的点作为后续质谱分析的候选蛋白质点 质谱鉴定 考染 →胶内酶解法酶解蛋白 nanoACQUITY UPLC超高效液相色谱键合乙烷杂颗粒柱为分析柱 Synapt High Definition Mass Spectrometry质谱仪（Waters公司）进行质谱分析 SWISS- PROT蛋白质数据库 液相色谱-质谱（LC-MS）仪 nanoACQUITY UPLC超高效液相色谱系统配备自动进样器 Synapt High Definition Mass Spectrometry 质谱仪 结果1.高丰度蛋白的去除效果 图1. 未去除高丰度蛋白的血清2-DE图谱 图2.去除高丰度蛋白后的血清2-DE图谱 结果2.2-DE图谱及图象分析 结果3.差异蛋白质斑点的鉴定 差异点为78个，根据3次2-DE结果，软件自动结合人工方式选取共同的蛋白质差异