动物检验检疫技术ppt课件.ppt

双抗体夹心法测定抗原 将抗体吸附于固相表面；加抗原，形成抗原-抗体复合物；加酶标抗体； 加底物。 底物的降解量＝抗原量。 竞争法测定抗原 将抗体吸附在固相载体表面；加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入酶标抗原；加底物。 对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。 间接法测定抗体 将抗原吸附于固相载体表面；加抗体, 形成抗原-抗体复合物; 加酶标抗体；加底物。 测定底物的降解量＝抗体量 病原菌检测 毒素检测 药物残留检测 病毒检测 寄生虫免疫诊断 血清学技术应用 二、分子生物学技术的应用 1、核酸杂交 核酸杂交是指两条来源不同但具有互补序列的核酸，按碱基配对原则形成双链的过程。 2、PCR技术 聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。 病原菌检测 病毒检测 其它病原体检测 分子技术应用 病原检查分离 将所采病料制成血片或组织抹片，经适当方法染色后镜检。或将病料处理后接种于鸡胚卵黄囊内或适宜的易感动物或接种细胞，培养出立克次体。 抗体检查 可用已知抗原作凝集试验、补体结合试验或中和试验，以证实患病动物血清中的相应抗体，从而诊断该病。中和试验可用豚鼠或鸡胚进行。 由于某些变形杆菌菌株可与某些立克次体多糖抗原的抗体发生交叉反应，故在医学上，常用这些变形杆菌菌株制成凝集抗原，用凝集试验检查某些立克次体病。这种凝集试验称为魏-裴二氏反应 三、支原体 1、形态结构及染色特性 支原体是目前发现的最小的最简单的，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞，细胞柔软具有高度的多形性。 常呈球形、杆状和丝状，偶见有梨状、分枝状、环状、螺旋状等不规则的形状。 支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器革兰氏染色呈阴性，通常着色效果不好，故常用姬姆萨染色染色法将其染成淡紫色 2、生物学特性 支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一） 支原体的生物合成能力较弱，虽然能够在人工培养基上生长，但营养要求比一般细菌高，常常需要在培养基中加入胆固醇、血清、腹水、牛肉浸膏和酵母浸汁等特殊成分。 对环境渗透压敏感 3、致病性与免疫性 除了少数的支原体为腐生或共生菌，大多数为寄生菌。 病原性支原体常常定居于多种动物的呼吸道、泌尿生殖道、消化道黏膜表面、乳腺以及眼等部位，并且对胸腺、腹膜、关节滑液囊膜的间质细胞以及中枢神经系统的亲和力较强。 4、微生物学诊断 直接镜检意义十分有限，应该取病料进行分离培养和形态学检验，做生理生化以及血清学试验方能进行鉴定。 （1）病料采集和保存 由于支原体侵害动物的黏膜表面，一般可用灭菌棉花拭子涂抹取样。 也可根据病变部位，取其肺、胸水、乳汁、鼻咽分泌物、关节液、淋巴结等，病料可经滤器除菌后再接种。 （2）培养方法 培养基中培养 鸡胚接种培养 动物接种培养 （3）菌落形态和染色观察 支原体在适宜的固体培养基上能长出具有“油煎蛋状”或“桑葚状”菌落 肺炎支原体菌落 电子显微镜镜下肺炎支原体呈现多型性 四、衣原体 1、形态结构 革兰氏阴性，圆形或椭圆形体； 姬姆萨染色 ，胞浆内有球形和椭圆形的衣原体? 2、生物学特性 介于立克次氏体与病毒之间，能通过细菌滤器，专性活细胞内寄生，生物学特性更接近细菌而不同于病毒。具有细胞壁，其组成与革兰氏阴性菌相似，在显微镜下能观察到； 有独特的发育周期，行二分裂方式繁殖。专性寄生，不能在人工培养基中生长； 对多种抗生素敏感，衣原体对热和常用消毒剂敏感 3、致病性 衣原体通过创面侵入机体后，原体吸附于易感的柱状或杯状粘膜上皮细胞并在其中繁殖，也能进入单核吞噬细胞繁殖。 在宿主细胞内存在原体和始体两种形态。具有感染性的原体通过胞饮作用进入宿主细胞，逐渐增大成为始体。始体无感染性，但能在空泡中以二分裂方式反复繁殖，形成大量新的原体，积聚于细胞质内成为各种形状的包涵体，宿主细胞破裂，释放出的衣原体则感染新的细胞。 4、微生物诊断 衣原体鉴定要点 在细菌培养基上不能生长，衣原体培养方法有鸡胚卵黄囊接种、小鼠腹腔、鼻内接种和多种细胞培养。 严格胞内寄生，在感染细胞的细胞质内可见衣原体原体和始体，感染细胞破裂后释放于胞外 寄生虫学诊断技术包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查等三个方面。 一、病原学诊断 根据寄生虫生活史的特点，从病体的血液、组织液、排泄物、分泌物或活体组织中检查寄生虫的某一发育虫期，这是最可靠的诊断方法 病原学诊断方法检出率较低，对于在组织中或器官内寄生而不易取得材料的寄生虫其检出效果不理想。 第五节 寄生虫检查 粪便检查