动物实验操作PPT课件.ppt

* 乳腺癌原位接种 PNAS 2010,10 * U87 脑胶质瘤成像 cancer research 2011,8 PTA of U87 human gliomas in mouse brains. A, representative bioluminescence images of nude mice bearing U87-TGL tumors with different treatments (see Materials and Methods). * 肿瘤转移 * 基因治疗载体的构建 AdTSTA-FL的表达活性比AdCMV-FL高100倍以上 AdTSTA-FL（107） AdCMV-FL（107） Days 5 7 10 13 800 600 400 200 500 400 300 200 100 ×103 ×105 * 标记细胞的方法基本上是通过分子生物学克隆技术, 将荧光素酶的基因插到预期观察的细胞的染色体内，通过单克隆细胞技术的筛选, 培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。基因、细胞和活体动物都可被荧光素酶基因标记。 * 体内，荧光素酶在ATP、氧气的辅助下，与外源注入的特异底物反应产生荧光。因此仅在活细胞内才会出现荧光，且荧光强度与标记细胞数目线性相关。基于此基础建立的动物模型使研究人员能更好的理解疾病的机制及过程。 * 国内的专家已经在肿瘤转移、基因治疗以及转基因小鼠领域开展了相关的研究。 * 实时、原位、活体观察药物对肿瘤的作用，高效灵敏。 * 2005年，美国一个科学院院士应用该技术发表了一系列的文章。 * two-step transcriptional activation (TSTA) system 代谢笼法:此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-3ml/24h，大鼠为55-75ml/24h 导尿法：常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿液 压迫膀胱法：此法适用于兔、猫、犬等大动物 输尿管插管法 膀胱插管法 膀胱穿刺法 剖腹采尿法 反射排尿法 尿液的采集 眼眶后静脉丛(窦)取血 器材：毛细管(玻璃或塑料均可)、1％肝素溶液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球 六、大鼠的采血 先将毛细管浸泡在1％肝素溶液中数分钟，取出干燥备用 将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位 左手拇指、食指抓住两鼠耳之间的颈部头皮，并轻轻向下压迫颈部两侧，致大鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉丛充血 右手持毛细管由大鼠的目内眦部插入结膜，使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推进，深度约3—5mm 轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出 采血量：0.4—0.6ml／次 方法步骤 脑立体定位技术 某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位置关系，确定脑内功能核团的位置 核团微量注射 电位引导 核团的刺激或损毁 脑立体定位仪 脑立体定位仪的调试: 摆稳定位仪，用水平仪测水平。 检验电极移动架上各个轴向滑尺是否保持互相垂直， 微量注射器针尖是否光滑垂直。 检查定位仪各衔接部位的螺丝有无松动。 检查头部固定装置两侧是否对称。 检查耳杆使两耳杆尖端相对,以此判定耳杆固定的准确程度。 鼠颅的固定: 将麻醉大鼠置于脑立体定位仪上，鼠颅依靠两耳杆及切牙钩三点固定。 脑立体定位仪坐标“0”点的测得: 按照Paxinos?大鼠脑立体定位图谱，以颅骨前囟即冠矢点作为前后方向的“0”参照点，当微量注射器的针尖对准冠矢点时,读取立体定位仪三维坐标上标尺的数值，此数值即是“0”点坐标。 生物信号在体检测遥控系统 Illustration of the high fidelity recording provided by the C10 telemeter, which allows for the accurate measurement of pulse pressures in mice despite their high heart rate (10 per second!). Bursts of renal sympathetic nerve activity made in a conscious, freely behaving rat 64 days following telemeter implantation PowerLab 系统 Faraday cage Vibration Isolation Table Microscope Micro-Manipulators Remote Controller Amplifiers CCD Camera 膜片钳系统 Micro-Manipulators DAD-VC syst