新感染的证据.ppt

（三） 免疫学证据 常用的方法和技术 临床应用 注意事项 （三） 免疫学证据 2　抗体检测　 人体受细菌感染后，经一定时间产生抗体，抗体的滴度随病原菌感染的过程而增多。因此，用巳知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应抗体及抗体滴度的动态观察，可辅助诊断。 血清学试验　适用于抗原性较强的病原菌。　 肥达试验　　伤寒 预防接种 回顾性诊断　　　早期诊断　　　 传统细菌检测　方法的补充 （四） 核酸证据 　　通过检测细菌遗传物质来证明感染的存在也许是病原体检查最为直接的方法。 基因探针 PCR 基因芯片 （四） 核酸证据 基因探针 PCR 基因芯片 应用 优缺点 …. 军团杆菌属、支原体属、衣原体属、立克次体属、分枝杆菌属、梅毒螺旋体 （四） 核酸证据 基因探针 　　制备核酸探针 　　杂交 　　标记物信号知道杂交结果并判断病原体的性质。 2.　PCR 　　特异引物 　　扩增 　　琼脂糖电泳 　　观察扩增结果，检出病原体。 三、真菌感染的病原学证据 真菌的病原学诊断方法包括 　　镜检 　　　培养 　　　血清学试验 　　　核酸检测　 以镜检、培养最为常用　 　 （一） 镜检证据 镜检是获取真菌感染证据最简单、快速和高效的实验室诊断方法。 高倍镜、油镜　　　菌丝、孢子 分直接涂片法 　　　　10%－30%NaOH 　染色涂片法 　革兰染色、乳酸酚棉篮染色、印度墨汁染色、 　刚果白染色、果莫里六胺银染色、过腆酸锡夫染色 镜检证据 真菌染色方法和应用 染色方法 临床应用 革兰染色 属细菌鉴别染色法，也用于真菌。假丝酵母菌和隐球菌呈革兰阳性。 乳酸酚棉篮染色 适合真菌染色的强酸性染料，主要用于丝状真菌及其培养后特征性的分生孢子的染色。 印度墨汁染色 在黑色的背景中使细菌荚膜或真菌孢子周围呈现透亮区，常用于自脑脊液标本的产荚膜的细菌和隐球菌。 刚果白染色 荧光素与真菌细胞壁上的纤维素结合，在紫外光激发下，发出篮白色荧光。适用于各种临床标本的真菌检测。与KOH合用，荧光色更亮。 果莫里六胺银染色 常用于真菌和肺囊虫的包囊期染色。主要用于鉴定肺、支气管组织中的肺囊虫和各种组织和细胞中的真菌，是测定真菌各成分的最好方法。 过腆酸锡夫染色 可以使真菌各成分着色，迅速鉴定菌丝型霉菌和酵母，诺卡氏菌难染色，皮炎芽生菌呈多色。 真菌染色方法和应用-例 （二）　培养证据 真菌的确诊需要培养和鉴定。 　　培养基　　普通培养基　特殊培养基 　　温度　　25－28度 　双相性真菌　可随温度变化而发生菌落形态及结构的变化，26度时为菌丝相，37度时为酵母相。 真菌培养过程中所表现出的生长速度以及培养后的大小、形态、颜色、质地和气味等均有利于真菌的初步鉴定，纯培养菌落的进一步染色镜检和生化试验有利于真菌的确诊。 （二）　培养证据 培养证据 培养方法 培养温度 菌落形态 双相真菌 免疫学证据 核酸证据 （三）其他证据 血清学试验　有助于侵袭性真菌的诊断 DNA探针技术可以缩短双相真菌的培养时间 　四、病毒感染的病原学证据 病毒感染的病原学证据包括 　 镜检证据 　　　培养证据 　　　免疫学证据 　　　核酸证据。 四、 病毒感染的病原学证据 （一） 镜检证据 光学显微镜检查 电子显微镜检查 适应症 单纯疱疹病毒感染患者的宫颈巴氏涂片 SARS-CoV（PUMC01株） 病毒颗粒电镜负染照片（?18000） （二） 培养的证据 培养细胞中是否有病毒复制的方法有: ①观察病毒感染细胞后出现的细胞病变效应（cytopathic effects，CPE）。 ②观察病毒感染细胞的红细胞吸附现象（hemadsorption）。 ③检测病毒感染细胞分泌的干扰素 ④通过荧光抗体技术检测病毒感染细胞中的病毒抗原。 细胞培养-例 SARS-CoV（PUMC01株）感染 Vero-E6细胞晚期CPE（?100）表现 （三） 免疫学证据 免疫学证据包括 检测病毒抗原的直接证据 检测病毒感染后抗体滴度变化的间接证据 （三） 免疫学证据 1　抗原检测 原理　　巳知抗体来检测临床标本或细胞培养物中相应的病毒，以证明病毒的存在。 常用方法有 免疫荧光法　　抗原的检测和定位 酶免疫法　　　定量检测可溶性抗原 放射免疫法　　定量检测可溶性抗原 胶乳凝集法　　简单、快速的抗原检测方法 （三） 免疫学证据 2　血清学检测　常用于难以培养病毒的感染　诊断 　常用的检测方法有 　　酶免疫法 　　免疫荧光法　　　早期 　　补体结合试验　　随后　 　　免疫印迹法　　　确诊 血清转换现象　是指感染急性期血清与感染2－3周以后的血清比较，抗体由阴性转为阳性的现象，是诊断新近病毒感染的最好的血清学证据。 （四） 核酸证据 基于核酸的检测技术临床主要用于： ①肠道病毒感染性脑膜炎。 ②单纯