专题 微生物的培养与应用讲述.docVIP

专题2 微生物的培养与应用 一、课标要求： （一）知识目标： 1、了解最基本的微生物技术（培养基的制备、高压蒸汽灭菌和干热灭菌、倒平板操作、平板划线操作和稀释涂布平 2、说明土壤中分解尿素菌的分离与计数的研究思路和实验设计 3、简述纤维素酶的种类及应用价值。 （二）能力目标： 1、掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌、平板划线法、稀释涂布平板法等基本操作技术。 2、运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物的分离与培养等实际问题。 （三）情感态度与价值观： 1、领悟实验原理 2、体验实验操作 3、交流实验体会 4、培养学生良好的科学态度与习惯。 二、知识网络构建 三、复习策略： 1、本专题的3个课题中，课题1介绍了最基本的微生物技术（培养基的制备、高压蒸汽灭菌和干热灭菌、倒平板操作、平板划线操作和稀释涂布平板法），这些知识和技能是应用选择培养基分离某种特定的微生物（课题2和课题3）的基础。本专题中所强调的无菌操作技术，还将有助于“专题3 植物组织培养技术”的顺利完成。因此，有关微生物技术内容是复习重点。 2、要理论联系实际：①学法上应理论联系实际，在做中学是最有效的复习方法途径，②联系农业生产实际，如尿素分解菌、固氮菌、硝化细菌等与土壤中氮素的利用有关，且相互联系，相互利用。更好地理解微生物活动与土壤肥力及农作物产量的关系。③联系发酵生产中防杂菌污染，运用所学知识和方法去分离选择培养某种微生物。④注重实验设计中应该遵循的原则：本专题涉及的设置对照组、重复组、怎样选材、怎样做假设、怎样对实验结果进行预测和分析、尤其注重分析实验失败的原因。 四、重要考点归纳 （一）培养基：不同的微生物需要采用不同的培养基配方，尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。 1、培养基的配制原则 ①目的要明确:目的包含两层含义，一指培养的微生物种类、二指培养的目的，是用于生产还是科学研究，因为二者对培养基的化学成分、物理状态等方面要求不同，例如用于生产的培养基应具有原料易得、价格低廉、配制方便等特点，而用于科学研究的培养基应具有成分含量准确，可多次重复实验的特点。 ②营养要协调:它表现在两个方面，一是营养物质的浓度要适宜，二是营养物质间的浓度比例要适宜。 ③pH要适宜：由于微生物在生长代谢过程中营养物质利用和代谢产物的形成往往会改变环境中的pH，为了维持培养基中出的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，最常用的缓冲剂是磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。 2、培养基配制的程序及注意事项 计算→称量→熔化 →调PH →灭菌 → 倒平板 ①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。 ②培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。操作时使锥形瓶的瓶口通过火焰，通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 ③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 ④在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 3、培养基的种类 按培养基物理性质划分: 名称 特征 功能 固体培养基 外观显固体状态的培养基 主要用于微生物的分离、鉴定 液体培养基 呈液体状态的培养基 主要用于工业生产 按培养基的化学成分划分 种类 特征 用途 天然培养基 用化学成分不明确的天然物质配成 主要用于工业生产 合成培养基 用化学成分已知的化学物质配成 主要用于微生物的分类、鉴定 按培养基的功能分 种类 制备方法 原理 用途 例 选择培养基 培养基中加如某种化学成分 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基 使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 加如某种试剂或化学药品 依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计 鉴别和区分菌落相似的微生物 伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌 （二）微生物的纯化培养（两种接种方法） 1、平板划线法：操作简单，但是单菌落不易分离 ①无菌操作：在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落