趋化因子CXCL在小鼠暴发型肝衰竭中对NK细胞作用研究（可编辑）.doc

趋化因子CXCL10在小鼠暴发型肝衰竭中对NK细胞作用研究 2010-05 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 趋化因子 CXCL10 在小鼠暴发型肝衰竭中对 NK 细胞的作用 硕士研究生 : 宋戈 研究生导师 : 宁琴 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染性疾病研究所 中文摘要 目的  在 HBV 引起的人类暴发型肝衰竭 fulminant hepatic failure, FHF 及慢加急性 肝衰竭 acute-on-chronic liver failure, ACLF 中，NK 细胞可以通过 趋化因子/趋化因 子受体 的途径向肝脏炎性中心募集，募集至肝脏的 NK 细胞发生活化并通过多种途 径导致肝细胞损伤。通过建立型鼠肝炎病毒（MHV-3）诱导的小鼠暴发性肝衰竭 模型，对趋化因子受体 CXCR3 及其配体 CXCL10 在该募集活化过程中所起的作用 进行研究，以期为人类病毒性暴发型肝衰竭及慢加急性肝衰竭中 NK 细胞的作用机 制提供新的研究线索。 方法  1.通过向 Balb/cJ 小鼠腹腔注射型鼠肝炎病毒（MHV-3）建立暴发型肝衰竭 模型；2.利用 Tranwell 趋化试验和流式细胞术分别检测：MHV-3 感染 36 小时后肝 细胞对各组织来源 NK 细胞的趋化能力；经 CXCL10 中和抗体阻断后的 MHV-3 感染肝细胞对 NK 细胞的趋化能力；正常肝细胞对个组织来源 NK 细胞的趋化能 力；人工重组鼠 CXCL10 蛋白对各组织来源 NK 细胞的趋化能力；3.利用流式细 胞术检测经 CXCL10 刺激后 NK 细胞的表面活化标记分子 CD69 的表达水平；4.利 用胞内因子染色法，经流式细胞术检测 CXCL10 刺激后 NK 细胞 IFNγ 和 TNFα 的分 泌水平。 结果 1.在 MHV-3 诱导小鼠暴发性肝衰竭模型中，与阴性对照组相比，MHV-3 感染 36 小时小鼠的肝细胞与人工重组鼠 CXCL10 蛋白在体外对脾脏、骨髓及外周血来源 1 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 的小鼠 NK 细胞均具有显著的趋化效果（P 0.05），其中 CXCL10 蛋白的趋化能力逊 于 MHV-3 感染 36 小时的小鼠肝细胞（P 0.05）；趋化因子 CXCL10 的单克隆中和抗 体可在一定程度上阻断 MHV-3 感染 36 小时小鼠肝细胞对 NK 细胞的趋化效果 （P 0.05）；2.经 CXCL10 蛋白体外刺激 12 小时后，小鼠 NK 细胞的表面活化标记 CD69 的表达水平及细胞因子 IFNγ 和 TNFα 的分泌水平同刺激前相比无显著差异 （P 0. 05）。 结论 1.趋化因子受体 CXCR3 及其配体 CXCL10 在小鼠暴发型肝衰竭模型中，对 NK 细胞向肝脏募集的过程中可能起到了部分但却重要的作用；2.趋化因子 CXCL10 在 体外对小鼠 NK 细胞的活化状态和细胞因子的分泌能力没有直接的调节作用。 【关键词】: 自然杀伤细胞；型鼠肝炎病毒；暴发型肝衰竭；趋化因子 2 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 The effects of CXCL10 on liver NK cells in MHV-3 induced mice fulminant liver failure M.M. Candidate:  Song  Ge Supervisor: Prof. Ning Qin Department of Infectious Disease Institute of Infectious Disease Tongji Hospital of Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Abstract OBJECTIVE  Many current studies have revealed that NK cell plays an essential role in the pathological process of HBV induced human fulminant hepatic failure FHF and acute-on-chronic liver failure ACLF . The chemokine/chemokine receptor pathway can trigger a migration of natural killer cells towards virus infected liver tissu