基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan+Real-Time+PCR检测方法的建立及应用.pdf

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 基因 型草鱼呼肠孤病毒 检测方法的建立及应用 殷 亮 王 庆 曾伟伟 李永刚 王英英 刘 春 梁红茹 石存斌 吴淑勤 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术重点实验室广东 广州 上海海洋大学水产与生命学院上海 摘要 为了建立和应用可检测基因 型草鱼呼肠孤病毒 的荧光定量检测方法实验 根据基因 型 的 保守序列分别设计扩增目的条带 普通引物 扩增 目的条带 荧光定量引物 和一条探针 同时构建含有目的片段的 作 为标准质粒 倍梯度稀释构建质粒拷贝数与值的标准曲线 结 果表明此方法在 拷贝 之间相关性较好 为 最小检测量为 拷贝 且与基因 型 型 以及其他病原核酸无交叉反应 运用该方法检测 份 草鱼出血病疑似样品阳性结果为 份而普通检测仅 份显示阳性 本研究建立了针 对基因 型 的荧光定量检测方法具有高效特异灵敏可重复性强的优点适合于目 前基因 型 的临床快速检测和病毒定量分析 关键词 草鱼呼肠孤病毒 基因 型 定量分析 中图分类号 文献标志码 草鱼 是我国淡水 胞特性和致病性方面均有一定差异性 曾伟伟 养殖的四大家鱼之一因其生长速度快饲料来源 等 根据不同分离株间的带型差异和目前已有 广养殖成本低等优点养殖量在淡水养殖中比例 基因序列比较提出 分离株至少存在 种 较高 年草鱼产量 万 约占全部淡 基因型并建立了可鉴别诊断 种基因型的 水鱼产量的 但每年草鱼由于各种病害问 检测方法 检测是目前运用最为广 题导致减产约 其中由草鱼呼肠孤病毒 泛的方法针对 不同片段和不同分离株已 引起的草鱼出血病危