酶分析法ppt课件.ppt

酶 分 析 法 教学目的和要求 熟悉： 1．酶活力的测定方法 2．酶法分析的测定方法 了解：酶分析法的原理 概 述 1.酶的概念是生物体内产生并具有催化活性的一类蛋白质，由于表现出特异的催化功能，因此酶被称为生物催化剂。 2.酶的应用：在体外进行催化反应 ①用以制造某些产品 ②用以去除某些物质 ③用以识别某种化合物 属于“酶分析法” ④用以测定某种物质 酶是由活细胞产生的具有催化作用的特殊物质，又称生物催化剂。 除极个别RNA为催化自身反应的酶外，其余所有的酶都是蛋白质。 生物体内一切生化反应都需要酶的催化才能进行！ 性能远远超过人造催化剂。 产物（product，P） 底物（substrate，S ） 概 述 3.酶分析法包括两种类型： 一是以酶作为分析对象，这类分析方法称为“酶活力测定”。 二是以酶作为分析手段，用以测定样品中用一般化学方法难于检测的物质，通常将这类分析方法称为“酶法分析”； 4.两类酶分析法的区别 相同：从原理到方法 不同： 酶活力测定法中，是以酶为分析对象。使用的底物应该过量。 酶法分析中，是以酶为分析工具或分析试剂,被检化合物（如：底物）是反应的限制因素 计算题 要求酶按其最大反应速度的99%的速度进行反应，求所需底物浓度［S］。 已知［S］＝9Km,求该酶体系的反应速度为何值？ 过氧化氢酶的Km为2.5×10－2mol/L，当底物浓度为100mmol/L时，求反应速度达到最大速度的百分数？ 第一节 酶活力测定法 一、基本概念 二、酶促反应的条件 三、酶活力的测定方法 四、测定过程中应注意的问题 一、基本概念 1.酶活力：指酶催化一定化学反应的能力。 2.酶活力的测定：是测定一个被酶所催化的化学反应的速度。 3.酶活力测定的目的：通过酶反应速度的测定，求得酶的浓度或含量 酶活力(enzyme activity)的测定 1．酶活力 酶活力是指酶催化某一化学反应的能力， 酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示，酶催化的反应速率愈大，酶的活力愈高；反应速率愈小，酶的活力就愈低。两者呈线性关系。 所以测定酶的活力就是测定酶促反应的速率。 酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。 在实际酶活测定中一般以测定产物的增加量为准。 V = [p] / t [p] = v t 引起酶促反应速率降低的原因 (1)底物浓度的降低； (2)产物浓度增加加速了逆反应的进行； (3)产物对酶的抑制或激活作用 (4)随着时间的延长引起酶本身部分分子失活等。 因此测定酶活力，应测定酶促反应的初速率，反应初速率与酶量呈线性关系，因此可以用初速率来测定制剂中酶的含量。 检验酶反应和测定系统是否适宜的标准 测得的反应速度必须和酶浓度间有线性的比例关系 一、基本概念 4.酶反应的速度：用单位时间内反应底物的减少或产物的增加来表示，酶反应的速度愈快所表示的酶活力愈高。 5.测定酶活力的方法：可用物理法、化学法或酶分析法等方法。 一、基本概念 6.常用的酶分析法 第一，终点法 第二，取样测定法 第三，连续测定法 一、基本概念 7.酶的活性单位（国际单位U）：在25℃及最适条件下，每分钟能转化一个微摩尔(μmol)底物的酶量定为一个活性单位。 8.酶的比活性：为一毫克(mg)酶的活性单位数目。 国际酶活力单位 1961年,国际生物化学协会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”(U)来表示酶活力，规定为：在最适反应条件(温度25℃)下，每分钟内催化1微摩尔(umo1)底物转化为产物所需的酶量,定为一个酶活力单位，即 1 U = 1 umol／min。 酶的比活力(specific activity) 比活力:每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示， 比活力=活力U／mg蛋白=总活力U/总蛋白mg 有时用每g酶制剂或每m1酶制剂含有多少个活力单位来表示(U／g或U／ml)。 比活力大小的含义：可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。比活力愈大，表示酶的纯度愈高。 活力单位(U)与比活力 U＝速度单位 每小时催化1克底物 每小时催化1ml某浓度溶液 每分钟催化1ug底物 酶产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 u/mg酶蛋白 u/ml酶蛋白 国际单位（IU）：在实验规定的条件下（25℃，最适pH、最适底物浓度时），1ul标本，以每分钟能催化1微摩尔底物的酶量为1个国际单位。 酶促反应速度的测定方法 酶活力测定实例 首先 确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过量），加