g9a抑制剂bix01294对脑胶质瘤u251细胞株作用机制的研究-mechanism of g9a inhibitor bix 01294 on glioma u251 cell line.docx

目录原创性声明 ………………………………………………………………………1 缩略词表 …………………………………………………………………………3 中文摘要 …………………………………………………………………………4 英文摘要 …………………………………………………………………………5 前言…………………………………………………………………………7 第一部分 组蛋白甲基转移酶 G9a、组蛋白 H3K9me、H3K9me2 在脑胶质瘤的异常表达及其意义材料和方法……………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………13 讨论……………………………………………………………………18第二部分 组蛋白甲基转移酶 G9a 抑制剂 BIX-01294 对脑胶质瘤 U251 细胞株 细胞增殖、凋亡、组蛋白 H3 乙酰化、组蛋白 H3K9、H3K27 甲基化 的影响材料和方法……………………………………………………………20 结果……………………………………………………………………25 讨论……………………………………………………………………29结 论 …………………………………………………………………………31 参考文献 …………………………………………………………………………32 致 谢 …………………………………………………………………………35 综 述 …………………………………………………………………………362缩 略 词 表HKMTsHistone lysine methyltransferases组蛋白赖氨酸甲基转移酶HDACihistone deacetylase inhibitor组蛋白去乙酰化酶抑制剂H3K4H3K9Histone H3 lysine 4histone H3 lysine9组蛋白 H3K4组蛋白 H3 第 9 号赖氨酸H3K9me3Histone H3 lysine9 tri-methylationH3K9me2histone H3 lysine9 di-methylation H3K9mehistoneH3lysine9mono-/wiki/Methylationmethylation组蛋白 H3 第 9 号赖氨酸三甲 基化组蛋白 H3 第 9 号赖氨酸二甲 基化组蛋白 H3 第 9 号赖氨酸单甲 基化H3K27histone H3 lysine27组蛋白 H3 第 27 号赖氨酸HP1Heterochromatin Protein 1异染色质蛋白 1LSD1Lysine Specific Demet hylase 1赖氨酸特异性脱甲基酶 1 MTSMethoxyphenyl tetrazolium salts四唑氮化合物PBSphosphate buffered solution磷酸盐缓冲液RPMrevolutions per minute每分钟转数SDSsodium dodecylsulfate十二烷基硫酸钠3G9a 抑制剂 BIX-01294 对脑胶质瘤 U251 细胞株作用机制的研究【目的】：研究组蛋白甲基化酶 G9a、组蛋白 H3K9me2、组蛋白 H3K9me1 在人 类脑胶质瘤组织和癌旁组织中表达的差异及临床意义。观察甲基化酶 G9a 抑制 剂 BIX-01294 在体外人类脑胶质瘤 U251 细胞株增殖、凋亡的改变、组蛋白 H3K9、 H3K27 甲基化及组蛋白 H3 乙酰化水平的影响，初步探讨其机制。【方法】： 1、免疫组织化学方法检测人类脑胶质瘤组织和癌旁组织中组蛋白甲 基化酶 G9a、组蛋白 H3K9me2、组蛋白 H3K9me1 蛋白的表达差异，统计学分析 探讨其临床意义。2、 MTS 法绘制 BIX-01294 作用人类脑胶质瘤 U251 细胞后的 生长曲线，TUNEL 法检测 U251 细胞调亡率的变化。3、Western blot 法检测 GX-01294 作用人类脑胶质瘤 U251 细胞后凋亡相关蛋白 BCL-2、Bax、Caspase-9、 Caspase-3；组蛋白 H3K9me、H3K9me2、H3K9me3、组蛋白 H3K27me1、组蛋 白 H3K27me2、组蛋白 H3 乙酰化状态的影响。【结果】：1、在脑胶质瘤的癌组织中组蛋白甲基转移酶 G9a 蛋白的阳性率为 86%（43/50），癌旁组织中阳性率为 42%（21/50），p0.01，有统计学意义；癌组 织中组蛋白 H3K9me2 的阳性率为 82%（41/50），癌旁组织中阳性率为 38%（19/50），确切概率法检验，χ2=18.38，p0.01；组蛋白甲基转移酶 G9a 蛋白和 组蛋白 H3K9me2 的表达与脑胶质瘤 WHO 分级相关；脑胶质瘤