galectin3基因多态性与乳腺癌相关性的研究及聚腺苷酸二磷酸核糖par在三阴性乳腺癌中表达的初步探讨-study on the correlation between galectin 3 gene polymorphism and breast cancer and the expression of poly ( adenosine diphosphate ribose par ) in triple negative breast.docx

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于必威体育官网网址，在年解密后适用本授权书。不必威体育官网网址。（请在相对应的方框内打“√” ）学位论文作者签名：日期：年月日 导师签名 ：日期：年月日中文摘要目的rs4644 是 galectin-3 基因编码区的单核苷酸多态 (single nucleotide polymorphism, SNP)位点，该位点处等位基因 C 被 A 所替换，导致 galectin-3 蛋 白序列的第 191 位的氨基酸由脯氨酸（P）变为组氨酸(H)。从而影响 galectin-3 的生物学行为。本研究旨在通过分析 rs4644 在乳腺癌患者中的分布情况，探讨 rs4644 与中国女性乳腺癌发生、发展的关系。聚 腺 苷 酸 二 磷 酸 核 糖 核 苷 酸 聚合酶 -1(poly(ADP-ribose)polymerase-1 ，PARP-1)是一种 DNA 损伤修复酶，它可以催化合成聚腺苷酸二磷酸核糖(pol（ADP-ribose），PAR)，参与 DNA 损伤的修复过程。PAR 可以反映细胞内 PARP-1 活性，被认为是一种潜在的预测 PARP-1 抑制剂治疗敏感性的生物标记分子。 rs1136410 是 PARP-1 单核苷酸多态性位点（single nucleotide polymorphism ， SNP），它可以影响 PARP-1 活性。虽然 PARP-1 抑制剂在三阴性乳腺癌治疗已 经进入Ⅲ期临床试验，但是可靠的评估 PARP-1 抑制剂治疗敏感性的生物标记 分子是缺乏的。因此，我们的实验旨在分析 PAR 在三阴性和非三阴性乳腺癌的 表达差异以及 PARP-1 活性位点 rs1136410 与 PAR 表达的相关性。方法应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP）方法检测 172 例乳腺癌患者冻存肿瘤组织和 17 例新鲜良性乳腺组织 rs4644 基因型，随机选取 10 例 PCR 样本测序，验证 PCR-RFLP 的实验结果。使用 PAR 抗体（MA1-90439 10HThermo）,运用免疫组织化学染色的方 法检测 32 例三阴性以及 39 例非三阴性乳腺癌的石蜡固定标本，并同时提取相 对应病例的冻存组织的基因组 DNA，检测 rs1136410 等位基因的位点差异。 结果1. PCR 产物经 NCOI 酶切后，野生纯合子（CC）型为 324bp 一条带；杂合子（CA）型为 324bp、171bp 和 153 bp 三条带；突变纯合子(AA)为 171、153 双条带。由于 2%琼脂糖凝胶电泳无法分辨 171bp 和 153bp 条带，仅显示 160bp 左右融合条带（图 1）。随机抽取 10 例 PCR 产物测序结果与电泳一 致。I2.乳腺癌组基因型分布为 CC 型 125 例（72.7％），CA 型 43 例（25.0％），AA型 4 例（2.3%）；C、A 等位基因频率分别为 293（85.2％），51（14.8％）； 对照组基因型分布为 CC 型 9 例（52.9％），CA 型 7 例（41.2％），AA 型 1 例（5.9%）；C、A 等位基因的频率分别为 25（73.5％），9（26.5％）。两组 基因型及等位基因频率分布均无明显统计学差异。3.rs4644 A 等位基因更容易出现在肿物 T＞2cm 及 ki-6714%的乳腺癌人群（P0.05），而与患者年龄，组织学分级，淋巴结转移，受体状态及 p53 表 达无明显相关性。4. 免疫组化染色结果显示 PAR 呈现不同的细胞定位着色，大部分病例为强- 中等的细胞核着色，另一部分病例为中等细胞质着色，PAR 的着色特点与 我们之前报道 PARP-1 着色定位相似。5.在三阴性乳腺癌中，62.5%的病例表现为胞核 PAR 低表达，而 37.5%的病例 表现为胞核 PAR 高表达；与此相反，在非三阴性乳腺癌中，仅 28.2%病例 表现为核 PAR 低表达，而 71.8%的病例表现为核 PAR