gli2基因沉默对人肝癌细胞系smmc7721侵袭转移能力的影响及相关机制-effect of gli 2 gene silencing on invasion and metastasis ability of human hepatocellular carcinoma cell line smmc 7721 and its related mechanism.docx

英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称APAmmonium peroxodisulfate过氧化硫酸铵BCABicinchoninicacid二喹啉甲酸BSABovine serum albumin牛血清白蛋白CLLChronic lymphocyticleukemia慢性淋巴细胞性白血病cDNAComplementarydeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸DMEMDulbeccos modifiedEagles mediumDulbecco改良的Eagle培养基DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜ECLElectrochemical luminescence电化学发光EDTAEthylenediaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸EMTEpithelial-mesenchymaltransition上皮间质转化FBSFetal bovine serum胎牛血清Gli2Gliomaassociated oncogenehomolog胶质瘤相关癌基因同源蛋白2HBVHepatitis Bvirus乙型肝炎病毒HCCHepatocellularcarcinoma肝细胞肝癌HCVHepatitis C virus丙型肝炎病毒MinMinute分钟MMP-2Matrixmetalloproteinase2基质金属蛋白酶2 mlMilliliter毫升MOIMultiplicityof infection感染复数MTT(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylt etrazolium bromide四甲基偶氮唑蓝1NCNegativeControl阴性对照PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟rpmRevolutions per minute每分钟转数SSecond秒SDSSodium dodecyl sulfonate十二烷基硫酸钠shRNAShort hairpin RNA短发夹RNATBSTris-buffered salineTris 缓冲液TEMEDTetramethyl ethylenediamine四甲基乙二胺TrisTrihydroxymethyl aminomethane三羟甲基氨基甲烷μgMicrogramme微克μlMicroliter微升2Gli2基因沉默对人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭转移能力的影响及相关机制摘要目的:探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Glioma-associated oncogenehomologue2,Gli2)对人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭转移能力的影响及相关机制。方法:设计3条靶向Gli2基因的shRNA,构建慢病毒载体(pLKD.CMV.GFP.U6shRNA-Gli2-1,2,3),转染到人肝癌细胞系SMMC-7721。采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,用流式细胞术检测转染率。利用qRT-PCR、Westernblot法筛选出最佳沉默效率的shRNA慢病毒,并检测转染前后Gli2mRNA和蛋白表达的情况;实验设shRNA-Gli2组(转染shRNA-Gli2的SMMC-7721细胞)、shRNA-NC组(转染NegativecontrolshRNA的SMMC-7721细胞)和对照组(未经处理的SMMC-7721细胞)。采用细胞黏附实验检测各组细胞同种及异种黏附率；采用Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力;采用体外血管生成实验检测各组细胞血管生成能力;利用qRT-PCR和Westernblot 法分析Gli2基因沉默对上皮标志物E-cadherin和间质标志物N-cadherin、MMPs家族中MMP-2及血管生成关键调控因子VEGF-A基金项目：重庆市科技攻关项目(NO:9902200426-0001)3mRNA和蛋白质表达的影响。结果:1．流式细胞术结果显示,shRNA慢病毒转染率为95%左右。2．筛选出沉默效果最佳的shRNA慢病毒shRNA-Gli2-1,shRNA-Gli2-1 组中Gli2 mRNA 的表达量为对照组的0.37±0.02倍,Gli2蛋白质的表达量为对照组的0.43±0.05 倍。后续实验均以shRNA-Gli2-1 转染SMMC-7721细胞,命名为shRNA-Gli2组。3．细胞黏附实验结果显示,shRNA-Gli2组与shRNA-NC组和对照组相比同种黏附率增加(13.71%±1.87 vs 6.35%±1.335.53%±2.01)(p0.05),异种黏附率降低(20.57%±1.44vs35.64%±2.5833.34%±1.40)(p0.05)。4．细胞迁移实验结果显示,shRNA-Gl