glp1类似物对糖尿病肾病大鼠肾组织pedf tgfβ1表达影响-effect of gl p1 analogue on pedf tgf β 1 expression in renal tissue of diabetic nephropathy rats.docx

学位论文独创性声明本人黄海齐声明，所呈交的学位论文系导师兰丽珍教授指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用）前言糖尿病肾病(DN)是在糖尿病病程中出现的以蛋白尿、血尿、高血压、水肿、肾功能不全等肾脏病变为特征的总称。是糖尿病代谢异常引起的肾小球硬化造成肾功能损害和障碍,是糖尿病最常见而又最难治的微血管并发症, 早期的主要病理特征是肾小球肥大, 肾小球和肾小管基底膜增厚及系膜区细胞外基质的进行性积聚;后期为肾小球、肾小管间质的纤维化,最终导致蛋白尿和肾功能衰竭[1] 。DN发病机制比较复杂,至今尚不完全清楚,与遗传因素，高血糖相关代谢紊乱、高血压以及吸烟、血脂异常、体内多种免疫炎症反应等多因素有关。胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种由肠道L细胞分泌的胰高血糖素原转录后修饰产物，Exendin-4是从动物唾液中分泌的天然胰高血糖素样肽-1类似物,随着对胰高血糖素样肽1(glucagon-likepeptide-1,GLP-1)研究的深入,其葡萄糖依赖性的降糖作用以及保护胰岛功能,抑制食欲等作用已逐渐被人们所认识,而GLP-1 的受体分布十分广泛,除了胰腺组织外,还分布于脑、肺、心脏、肾脏等,其分布的广泛性也决定其作用的广泛性。包括促胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、神经营养以及在心血管方面的作用[2-4]。近年来,人们对GLP-1的研究发现其对肾脏具有保护作用,加强这方面的研究可能会为临床上糖尿病肾病的治疗带来新的希望。色素上皮细胞衍生因子（PEDF）是一种分泌性糖蛋白,含418个氨基酸,分子量为50kD,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(SERPIN)基因家族。PEDF被认为是一类具有抗炎作用的细胞因子[5],不但抑制了TNF-α,VEGF,MCP-1及ICAM-1的过度表达，同时还具有抑制氧化应激和抗纤维化的作用，对于肾脏保护具有重要作用。转化生长因子β1（TGF-β1）在糖尿病肾病的发生与发展中密切相关的致病因子之一，在糖尿病肾脏中转化生长因子-β1 的表达是明显增加的,并导致了系膜细胞的增殖和细胞外基质的沉积[6],因此阻止TGF-β1 的表达亦应成为治疗糖尿病肾病时重要的靶点[7]。本研究通过观察不同剂量Exendin-4对糖尿病肾病大鼠的影响，观察其对血糖、血脂、24h尿蛋白及肾脏病理变化的影响，同时采用免疫组化和RT-PCR观察肾组织PEDF、TGF-β1蛋白及基因表达的变化，进一步探讨GLP-1类似物治疗糖尿病肾病的作用机制。材料与方法1 材料1.1主要试剂：Exendin-4东莞宝丽健生物工程研究开发有限公司提供STZ购自美国Sigma公司尿蛋白试剂盒购自南京建成科技有限公司DAB显色剂购自武汉博士德生物有限公司PEDF抗体购自武汉博士德生物有限公司TGF-β1购自武汉博士德生物有限公司聚合HRP标记性抗IgG购自武汉博士德生物有限公司TrizolRNA 提取试剂盒购自上海生物工程有限公司β-actin 引物购自上海生物工程有限公司PEDF引物购自上海生物工程有限公司TGF-β1 引物购自上海生物工程有限公司1.2主要仪器电子天平（MP200-Ⅰ）上海第二天平仪器厂PH酸度计PHS-25型上海伟业仪器场生产强生血糖仪美国强生公司生产723型可见分光光度计山东高密彩虹分析仪器有限公司生产贝克曼-2000全自动分化分析仪美国贝克曼公司生产BI-2000医学图像分析系统成都泰盟科技有限公司荧光定量 PCR 仪 TL988西安天隆科技有限公司冷冻离心机湖南湘仪离心机仪器有限公司生产1.3 主要试剂的配置1、