glp12836多肽对内质网应激介导的糖尿病的影响-effects of glp 12836 polypeptide on endoplasmic reticulum stress-mediated diabetes mellitus.docx

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果 的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体 已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明 确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名： 日期：2015 年 5 月日学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华 中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。必威体育官网网址□ ，在年解密后适用本授权书。本论文属于不必威体育官网网址□。（请在以上方框内打“√” ）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年 月 日日期：年 月 日目录主要缩略词 1摘 要 3Abstract5第一章背景介绍 7糖尿病（Diabetes mellitus）7内质网应激（ER stress）7Akita 小鼠（Akita mice）81.4胰高血糖素样肽-1（GLP-1）及其代谢物和类似物8第二章实验材料和方法 112.1实验材料 112.1.1 主要实验试剂 112.1.2 主要实验仪器 122.1.3 实验中的一些主要溶液及其配方 132.2实验方法 152.2.1 化学合成 GLP-1(28-36) 152.2.2 构建稳定表达 GLP-1R 的 INS-1 细胞 162.2.3 与 GLP-1R 结合活性的测定实验 172.2.4 细胞内 cAMP 水平的测定 182.2.5 毒胡萝卜素(TG)诱导处理 beta-TC6 细胞 202.2.6 动物实验 202.2.7 胰腺组织的苏木精-伊红染色（HE） 212.2.8 蛋白免疫印迹实验（Western Blot） 222.2.9 数据分析 24第三章实验结果 253.1 GLP-1(28-36)升高细胞内 cAMP 水平 253.2 与 GLP-1R 的结合活性检测 263.3 GLP-1(28-36)对毒胡萝卜素(TG)诱导 beta-TC6 细胞内质网应激反应的影响 263.4 腹腔注射 GLP-1(28-36)对 Akita 小鼠血糖和体重的影响 283.5 腹腔注射 GLP-1(28-36)改善 Akita 小鼠的胰岛损伤 293.6 GLP-1(28-36)对 Akita 小鼠胰腺组织中内质网应激反应的作用 30第四章实验结论与讨论 32参考文献 35综述 41综述参考文献 49致谢 57附录 58主要缩略词ATF6 BSABiP BWDPP-IVactivating transcription factor 6 bovine serum albuminbinding immunoglobulin protein body weightdipeptidyl peptidase-IV激活转录因子牛血清白蛋白 结合免疫球蛋白 体重二肽基肽酶 IVEGFPenhanced green fluorescent protein增强型绿色荧光蛋白eIF2αeukaryotic initiation factor 2α核翻译起始因子 2αERendoplasmic reticulum内质网应激FBGfasted blood glucose空腹血糖FBSfetal bovine serum胎牛血清ggravity离心力GLP-1glucagon-like peptide-1胰高血糖素样肽 1GLP-1Rglucagon-like peptide-1 receptor胰高血糖素样肽 1 受体HEhematoxylin and eosin苏木精和伊红HSP70heat shock protein 70热休克蛋白 70HTRFhomogeneous time resolved fluorescence均相时间分辨荧光KDkilodalton千道尔顿INS-1 cellsrat insulinoma cells大鼠胰岛素瘤细胞IRE1inositol-requiring enzyme 1肌醇依赖酶 1IRE1αinositol-requiring enzyme 1 alpha肌醇依赖酶 1αJNKc-jun-N-terminal kinasec-jun 氨基末端激酶NEPneutral endopeptidase中性肽链内切酶NFBGnon-fasted blood glucose非空腹血糖PDIprotein disulfide isomerase蛋白二硫键异构酶protein kinase R (PKR)-like蛋白激酶 R