goptx和pgoptx的药效学及药代动力学研究-pharmacodynamics and pharmacokinetics of go ptx and pg opx.docx

Athesissubmitted to Zhengzhou University for the degree ofMasterThe Pharmacodynamic and Pharmacokinetic Study of GO-PTXand PGO-PTXByBingyang Xue Supervisor: Prof.Xiaotian Li Profession: PharmacySchool of PharmaceutialScienceApril2016原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发图或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发图、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日摘要背景：紫杉醇是目前治疗乳腺癌和卵巢癌的一线药物，临床疗效较好。但是，紫杉醇的水溶性低是它的一大缺点，而临床使用的紫杉醇助溶剂又有一些严重的副作用，如神经毒性，肾毒性等。此课题中，氧化石墨烯紫杉醇（graphene oxide-paclitaxel，GO-PTX)和功能化的氧化石墨烯紫杉醇（functionalized graphene oxide-paclitaxel，PGO-PTX）是以氧化石墨烯和功能化的氧化石墨烯为载体，经过结构修饰及活性筛选后得到的新型紫杉醇载体药物。前期研究表明，PGO-PTX 和GO-PTX具有载药量较高，水溶性较强，毒性较低的特点，在未来临床应用中具有广阔的发展前景。目的：本课题旨在对GO-PTX和PGO-PTX，从细胞和动物水平，进行抗肿瘤药效学评价及大鼠体内药代动力学研究，为该新型载体药物的更深入研究提供理论依据。方法：PGO-PTX、GO-PTX 对A2780细胞生长和凋亡诱导的影响本实验采用经典的MTT（四氮唑盐）法，通过实验数据计算细胞存活率及PGO-PTX、GO-PTX 药物的IC50，评价PGO-PTX、GO-PTX药物对人卵巢癌细胞株A2780的增殖抑制作用，以及PGO、GO药物载体对人卵巢癌细胞株A2780 的毒性作用。同时，采用DAPI 染色法检测细胞凋亡效应，通过对荧光显微镜下细胞形态学的分析，评价PGO-PTX、GO-PTX的凋亡诱导作用，得出实验结论。PGO-PTX、GO-PTX 对荷瘤裸鼠移植癌的药效学研究本实验建立了人卵巢癌细胞株A2780裸鼠移植瘤模型，进行了PGO-PTX、GO-PTX药物对荷瘤裸鼠移植癌的药效学研究。20 只雌性裸鼠随机剪脚趾编号，均分为四组，即模型对照组，阳性对照组，PGO-PTX药物组、GO-PTX药物组。根据不同分组，在当天及第3、5、7、9 天尾静脉注射相应药物或空白溶媒，并I测量瘤块大小。最后一天处死取瘤，称重。对不同时间的肿瘤体积及瘤重抑瘤率进行数据统计分析，得出实验结论。血浆中PGO-PTX、GO-PTX分析方法的建立样品处理采用甲基叔丁基醚沉淀蛋白的方法，选择硝苯地平为内标，以乙腈-水（0.05%甲酸，PH=3.5）=45：55（v/v）为流动相等度洗脱，流速为0.2mL/min，进样量10 μL。以Thermo BDS HYPERSILC18（2.1×100mmI.D.，2.4 μm）柱进行分离；采用三重四级杆质谱仪，以电喷雾电离源作为液相和质谱连接的接口，多反应监测(MRM) 模式进行正离子检测。用于定量检测的离子对为m/z876.3→m/z 308.0 (紫杉醇)和m/z 347.3→m/z 315.4 (内标硝苯地平)。通过对分析方法的确证，得出实验结论。PGO-PTX、GO-PTX 在大鼠体内的药代动力学研究本实验进行了PGO-PTX、GO-PTX在SD大鼠体内的药代动力学研究，为药物在动物体内的变化规律提供重要的评价参数。将12只SD大鼠随机分为三组，即紫杉醇组，PGO-PTX组、GO-PTX组，每组4只，雌雄各半。实验前一天SD大鼠禁食过夜后，每组分别以0.14mg/kg的药物剂量，尾静脉注射14 μmol/L的紫杉醇、PGO-PTX和GO-PTX。分别于给药前，及给药后0，0.03