保障孵化厅质量的微生物学工具试验室方法-Ceva.PDF

第9期/2013年6月 保障孵化厅质量的微生物学工具： 实验室方法 Vincent TURBLIN 博士，法国诗华动物保健公司亚太区家禽事业部市场副总监 多数情况下，监测分析着重于对细菌（如大肠杆菌群，假单胞菌和金黄色葡萄球菌）和 霉菌（包括曲霉属）的监测。病毒分离和/或PCR 对于常规检测来说的确复杂而且昂贵， 在 某种程度上，对细菌和真菌的检测已足以对卫生程序实施的效果进行评估。 根据采样样品的不同，有不同种类的检测程序，样品包括：空气，平地表面，蛋壳，液 体，绒毛或雏鸡。根据检测程序的不同，选择培养细菌的材料和培养基将有所不同。 图1：肠杆菌科 （透射电子显微镜法） 微生物学监测所需材料 根据实验室选择的程序选择材料，并依据材料采样。培养真菌或细菌可以选择不同种类的培养基： 或琼脂：一种固体培养基，其坚实均一胶状的性质可允许直接接种微生物，并在相同材料上进行繁殖。 或肉汤：一种液体培养基，适用于分离和鉴别在琼脂培养基上生长的特殊微生物。 琼脂培养基通常用于确定存在的微生物的种类和数量。为了随时间变化比较菌落数，重要的是总是使用相同种类的琼脂。 琼脂培养基提供微生物生长所需的营养物质。不同类型的微生物具有不同的营养需求，根据其对抑制性化合物的易感性，可 以使用选择性琼脂以确定一个特定的位置中存在的微生物的数量和类型。 应该使用何种培养基？ 应该根据监测的目的选择琼脂的类型： • 对于解决疑难和帮助鉴定特定种类细菌时，应该选择特殊种类的培养基。用于鉴别特殊 种类微生物如假单胞菌，葡萄球菌，链球菌以及曲霉菌的培养基已经被很多科研供应商家制 成预先倒好的平板进行商业化出售。 图2 大肠杆菌（麦康凯培养基） • 但对于作为环境卫生和生物安全程序效率的追踪步骤，例行监测孵化场的微生物负荷总数来说，有三种类型的培养 基常常用到：检测总菌群的TSA 培养基，检测霉菌的PDA 培养基，以及检测大肠杆菌群的酵母和麦康凯培养基。 首先，通用的细菌培养的培养基如胰蛋白酶大豆琼脂 （TSA ）或营养琼脂不含有任何抑制作用的化合物，并允许多种 类型的细菌生长。TSA 可能是二者中更好的，因为它包含两种蛋白胨并被设计为支持各种各样脆弱或挑剔的微生物生长。非 选择性培养基通常在计数前37℃ （98.6oF ）培养48 小时。 至于麦康凯琼脂 （MA ），它常用来检测大肠菌群。紫红胆汁琼脂（VRB ），曙红亚甲基蓝琼脂培养基（EMB）也可以被 使用，但麦康凯可能比其它两个培养基检测到略广泛的细菌种类。麦康凯琼脂通常在37℃培养48 小时。大肠菌群（包括大 肠杆菌）在麦康凯上产生菌落是红色的，但无色透明的也应计算在内，因为这些菌落表明存在其他有害细菌（如沙门氏菌）。 最后，沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂是培养霉菌和酵母菌的通用培养基。对于培养霉菌来说，马铃薯葡萄糖琼脂 培养基（ PDA ）略优于沙氏葡萄糖琼脂培养基（ SDA ），可能是因为SDA 最初是用来检测伴有皮肤感染的真菌（如指环虫） 而被制作出来的。用于检测霉菌的培养基通常含有抗生素（如氯霉素0.05 克/升）以抑制细菌的生长，并允许霉菌优先生长。 为了防止失去活性，抗生素一般在培养基高压灭菌和冷却后添加。霉菌的生长速度比细菌慢。因此，通用的霉菌培养基一般 是在室温下培养3〜5 天。 图3 ：蛋上生长 （左）和土豆葡萄糖琼脂上（右）生长的曲霉菌 虽然预先倒好的培养基比在您的工厂中个人准备的脱水培养基更加昂贵，但制作这些培养基的公司能保证其质量和无 菌。由于培养基质量和无菌会影响计数，在决定购买或制备您自己的培养基时应考虑质量和成本。 怎样制作孵化厅检测用培养基？ 首先，用于制作培养基的地方是非常重要的：在孵化厅内找一个人员流动少和空气污染概 率低的房间。例如，疫苗室可能是一个很好的制备培养基的场所。