五加科人参属中药皂苷类化合物的离散提取及抗氧化活性研究.pdf

摘 要 人参、西洋参和三七系五加科人参属药材中的三种重要代表，其主要有效成分均为 达玛烷型人参皂苷。大量研究结果表明：皂苷类化合物具有较强的生物活性，因此，对 于人参皂苷的研究和开发具有重要的理论意义和实际应用价值。 （1）分别采用回流、超声和温浸提取法对人参、西洋参和三七中的皂苷类化合物 进行了分离提取对比研究，并应用高效液相色谱法（HPLC ）对皂苷类化合物进行定量 分析，对比研究表明超声提取法快速、安全、简便、成本低且不破坏成分，在此基础上， 采用超声提取法对三种药材中的皂苷类化合物进行大量的分离提取，总皂苷粗提物应用 高速逆流色谱技术进行分离纯化研究。 （2 ）本文采用高速逆流色谱技术（HPCPC ）和蒸发光检测器（ELSD ）的联用技 术对皂苷类化合物进行分离纯化，建立了 HPCPC-ELSD 法分离五加科人参属中药的皂 苷类化合物的新方法。采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1:1:2，v/v/v) 为溶剂体系，经一次分离 从三七总皂苷粗提物中分离纯化得到三七皂苷 R ，人参皂苷Rg 、Re 和 Rb ；采用乙酸 1 1 1 乙酯-正丁醇-水(1:1:2，v/v/v) 为溶剂体系，从西洋参总皂苷粗提物中分离得到了 Re 、 Rb1 和 Rc ；采用乙酸乙酯-正丁醇-水(0.8:1.2:2，v/v/v) 为溶剂体系，从人参总皂苷粗提 物中分离得到了人参皂苷 Rb1 和 Rb2 两种单体皂苷。应用 HPLC-ELSD 技术对分离得到 的皂苷类化合物进行分析，通过与已知化合物的保留时间相对比，进行定性分析；根据 其峰面积百分比，确定其纯度均在 95% 以上。应用电喷雾串联质谱（ESI-MSn ）进一步 确定化合物的结构。结果表明，应用 HPCPC-ELSD 从中草药粗提物中分离无紫外吸收 或者紫外末端吸收的活性物质是一种高效可行的分离技术，HPLC-ELSD 和 MSn 为皂苷 类化合物纯度检验和鉴定分析提供了较好的分析方法。 （3 ）以人参、西洋参和三七的回流、超声和温浸提取的皂苷类化合物为研究对象 评价其抗氧化活性。首次采用 Photochemi-luminescence (PCL)抗氧化活性体外评价体系 为分析平台系统考察皂苷类化合物的抗氧化活性，并利用 DPPH 法进行对照评价。结果 表明：三七总皂苷，超声提取物抗氧化能力最佳，在 PCL 法中相当于 2.53 nmol Vc ，在 DPPH 法中其清除率为 32.57%，其总皂苷含量为209.62 mg/g ；回流提取物 1.71 nmol、 30.82%，总皂苷 128.97 mg/g；温浸提取物 1.07 nmol、18.60%，总皂苷 100.44 mg/g，其 抗氧化能力和皂苷含量呈量效关系。对于西洋参和人参总皂苷，超声提取物皂苷含量最 IV 高（73.27 mg/g 和 17.48 mg/g），依次为回流（52.26 mg/g 和 10.42 mg/g）和温浸提取物 （48.62 mg/g 和 9.89 mg/g ）；但在抗氧化实验中，回流提取物清除自由基能力（2.28 nmol 和 23.62% ，0.63 nmol 和 22.98% ）比超声提取物强（2.18 nmol 和 23.51% ，0.61 nmol 和 21.20% ），但两者相差不大；温浸提取物抗氧化能力最低 （1.07 nmol 和 18.60%；0.42 nmol 和 14.37%），其抗氧化能力和皂苷含量间存在一定差异。 关键词：人参；西洋参；三七；皂苷类化合物；HPCPC-ELSD ；HPLC-ELSD ；抗 氧化活性 V Abstract Panax Ginseng C.A.Mey, Panax quinquefolium L. and Panax notoginseng