共振光散射法研究金属离子-核固红-蛋白质体系的相互作用及其剖析应用.pdf

摘要 53飞 ＼姻y删2290 蛋白质的定量测定是生物化学、生物技术和临床医学中经常涉及的内容。它已经成 为蛋白质研究的一项重要内容，具有重要的意义。因此，建立新的定量测定蛋白质的方 法在很多领域都是非常重要的，如生命科学，临床诊断和定量检测。共振光散射技术因 为灵敏度高、稳定性好、方法简单、试剂廉价、易操作等优点已经被广泛用于蛋白质、 核酸和药物等组分的测定。本文采用共振光散射法并结合荧光光谱法和紫外吸收光谱法 射信号强度的变化值与蛋白质的浓度成正比，建立了测定纳克级蛋白质的新方法。 在pH为3．7时，核固红与Cu2+能够形成2：1的螯合物。该螯合物在蛋白质表面通 过静电作用力和疏水作用力聚集形成聚合物。该现象不仅导致吸收光谱、荧光光谱发生 变化，而且导致共振瑞利散射明显增强。在430 nnl处，人血清白蛋白(HSA)和牛血清白 蛋白(BSA)分别在O．10～8．0 1．4 pg／mL和0．19～1pg／mL的浓度范围内与增强的共振瑞利散 射程度成良好的线性关系，对应的检测限分别是0．076 mn lag／mL和O．105pg／mL。在598 处，HAS和BSA分别在0．053．0 I．tg／mL和O．096~4．78I-tg／mL的浓度范围内与增强的共 振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应的检测限分别是26 ng／mL和33ng／mL。并对 人血清样品进行了分析。 在pH4．0的溶液中，核固红与Ca2+能够形成螯合物。采用荧光分析法测得螯合物组 成为Ca(II)：核固红=1：2。该螯合物通过静电作用力和疏水作用力在蛋白质表面聚集， nm 导致体系的吸收光谱、荧光光谱和共振瑞利散射光谱变化。在最佳实验条件下和430 处，HSA和BSA分别在0．3—7．0 I_tg／mL和O．1~9．0pg／mL的浓度范围内与增强的共振瑞 利散射程度成良好的线性关系，对应的检测限分别是23ng／mL和12ng／mL。此外，在 592Iun处，HSA和BSA分别在0．05～2．0 I-tg／mL和0．04～2．0p．g／mL的浓度范围内与增强 的共振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应韵检测限分别是6．0 ng／mL和5．0ng／mL。 方法用于分析人血清、尿样及唾液样品。 在pH4．0的溶液中，核固红和Al”能够形成l：l的螯合物。该螯合物通过静电作用 力和疏水作用力与蛋白质发生相互作用形成聚集体。这种作用导致吸收光谱、荧光光谱 变化和共振瑞利散射强度的增强。在440nm处，HSA和BSA分别在0．20～12．O I．tg／mL 和0．60-．-26．0 I．tg／mL的浓度范围内与增强的共振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应 的检测限分别是19．9 ng／mL和40．9ng／mL。此外，在584 O．05“．0 gg／mL和0．02～14．01．tg／mL的浓度范围内与增强的共振瑞利散射程度成良好的 线性关系，对应的检测限分别是11．5 ng／mL和23．3ng／mL。方法已用于人血清样品、尿 样及唾液样品中蛋白质含量的测定。 关键词： 瑞利散射，荧光光谱，紫外一可见光谱 II