冻凝胶团体柱的制备及固定化血管紧张素转化酶的研究.pdf

摘 要 血管紧张素转化酶(Angiotensin．conveningenz)，me，简称ACE) 是肾素．血管紧张素系统的重要酶类，是高血压治疗的关键靶点之一。 固定化酶是20世纪50年代发展起来的一项新技术，目前对固定化酶 的研究主要集中在寻找性能良好的载体上，良好的载体可以明显提高 固定化酶的酶解效率，使酶解过程更加稳定地进行。利用冻凝胶技术 制备的整体柱载体具有较好的渗透性、较小的传质阻力、高容量、结 构均匀、制备成本低。从成分复杂的中药体系中筛选ACEI一直是新 药开发的热点研究领域。为此，本文对冻凝胶整体柱的制备及其固化 血管紧张素转化酶筛选中药中ACEI进行了研究。 本论文主要研究工作如下： 1．发展了冻凝胶法制备壳聚糖整体柱。探讨了不同壳聚糖浓度、 不同戊二醛量对壳聚糖冻凝胶整体柱的影响。通过扫描电镜观察到该 整体柱材料具有良好孔径大小，具有良好的骨架密度、平均孔容量、 孔隙率，含水量较低，该壳聚糖柱的流速与柱前压符合 Hangen—poiseuille线性关系。 2．冻凝胶法制各卵蛋白／壳聚糖交联整体柱载体，通过戊二醛交 联将血管紧张素转化酶(ACE)键合固定后形成酶整体柱。文中优化了 卵蛋白／壳聚糖整体柱载体制备条件、ACE固定化条件，并考察了酶 整体柱的性质。结果表明该固定化ACE的pH范围更宽，并向酸性 方向偏移，最适反应温度变宽，温度稳定性好，并且有很好的重复利 用率和贮存稳定性。 3．采用冻凝胶技术制备的卵蛋白／壳聚糖整体柱载体固定化 ACE，以此为酶反应器，利用亲和色谱法，联用Ⅷ，LC，通过实验组 与对照组对应的各组分色谱峰的差异，实现从天然药物黄芩中快速筛 选ACEI。 关键词：冻凝胶；血管紧张素转化酶；抑制剂；固定化酶；亲和色谱； 高效液相色谱 ABSTRACT oneofthe kindsof AngiotensinconVertingenzyme(ACE)iskey in anda forthetreatmentof enz：ymeresin—angiotensinsystemkeyta唱et theimmobilizedthatis anew Cullrently， hypertension． enzyme inthe1950sis concentratedin f．or techn0109ydeVeloped mainly looking a ofaca而er，a camercan goodperfomance good significantlyimproVe the oftheimmobilized enzymatichydrolysise硒ciency enzyme，good carrierofthe is morestable．The of enzymaticprocess permeability monolithicmaterialsis alloweemcientmass of good，which transport soluteswithinthematerial．TheuseofimmobilizedACEfor screening hasbeena researchareafor ACEI