功能化载玻片的修饰要领研究及其在细胞分析中的应用.pdf

功能化载玻片的修饰方法研究及其在细胞分析中的应用 摘要 细胞黏附过程是生物重要的生理过程，大多数细胞都要依赖在表面的黏附、 伸展、繁殖行为而进行正常的生理活动。在宫颈癌的筛查方法中，液基细胞学 技术是以载玻片作为脱落细胞的黏附基底。研究载玻片的修饰方法，增强细胞 在基质上的黏附，在实际疾病诊断中可以提高诊断的准确率。本文将生物相容 性材料修饰到载玻片表面，并在液基细胞学技术中进行应用，发现使用多聚赖 氨酸、壳聚糖、胶原蛋白等细胞相容性材料对载玻片基底进行修饰后，可以增 强宫颈脱落细胞在基底上的黏附作用，减少在制作细胞涂片过程中，以及在染 色过程中的脱片现象，以提高诊断准确性。据此，本论文按以下三部分进行研 究： 第一部分硅烷化试剂GOPS与多聚一L一赖氨酸双修饰载玻片修饰方法的建立及 其在液基细胞学中的应用 在载玻片上利用3．甘油丙基三甲氧基硅烷(GOPS)进行修饰后，得到表面 为环氧键的载玻片；然后将环氧键打开与多聚一L一赖氨酸(PLL)的氨基结合， 力显微镜(AFM)对修饰后的载玻片表面进行表征。利用宫颈脱落细胞研究修 饰后的载玻片对细胞的黏附效果。将宫颈脱落细胞样品制成细胞涂片，经巴氏 染液染色后，置于显微镜下观察、拍照。空白载玻片、传统的PLL修饰的载玻 片进行对照实验。结果显示，宫颈脱落细胞在对照载玻片和GOPs．PLL修饰的 GOPS—PLL修饰的载玻片对宫颈脱落细胞的黏附效果及均匀度均较未经修饰及 传统的PLL修饰的载玻片要好，用该种方法修饰的载玻片有望应用到液基细胞 学技术中，对疾病进行诊断，以提高诊断的准确率。 第二部分壳聚糖功能化的载玻片对Hela细胞的黏附研究及其在液基细胞学中 的应用 在载玻片基底上，利用3一氨基三乙氧基硅烷(APTES)对载玻片进行氨基 化修饰，通过戊二醛交联并与壳聚糖反应后，得到壳聚糖修饰的载玻片。利用 原子力显微镜(AFM)对其表面形貌进行表征并计算粗糙度。研究宫颈癌Hela 细胞在壳聚糖修饰的载玻片上的黏附、生长情况，并筛选出对Hela细胞黏附效 果较好的载玻片。将其进行宫颈脱落细胞的黏附实验，将宫颈脱落细胞样品制 作成细胞涂片，经唧染液染色后，置于显微镜下观察、拍照。在空白载玻片上 进行对照实验。结果显示，壳聚糖修饰的载玻片，对宫颈脱落细胞的有较好的 黏附效果，染色后的细胞形态清晰、颜色鲜亮，便于病理医生进行诊断。用该 种方法修饰的载玻片有望应用于液基细胞学技术中，进行疾病诊断，以提高诊 断的准确率。 第三部分胶原蛋白功能化载玻片的修饰方法建立及其在液基细胞学中的应用 利用胶原蛋白，经过两种不同的载体修饰的方法修饰载玻片：一种方法是 将胶原蛋白利用化学法直接修饰于载体表面，另一种方法是将胶原蛋白嫁接到 1％壳聚糖处理后的基质表面。利用原子力显微镜(AFM)对经过修饰后的载玻 片的表面进行表征，并比较这两种不同的修饰方法得到的载玻片对宫颈脱落细 胞的黏附行为。将宫颈脱落细胞样品涂布于修饰后的载玻片上，制成细胞涂片， Il 经娅染液染色后，置于显微镜下观察、拍照。对照实验在未经修饰的载玻片上 进行。结果显示，两种修饰方法后的胶原蛋白载玻片，对宫颈脱落细胞的黏附 效果均较未经修饰的载玻片效果要好，细胞形态清晰。用该种方法修饰的载玻 片有望应用于疾病诊断中，以提高诊断的准确率。 关键词：细胞分析；功能化载玻片；壳聚糖；胶原蛋白 III THE 仆TⅦSTGATl0NOF MODIFICATION Ⅳ匝THOD0FFUNCTIONALIZEDSLIDESAND INTHE ANA工，YSIS APPLICATIONCELL ABSTRACT ne ofcenadhesionis of process an硫portantphysi0109icalprocessorganisms， andmost妯ndsofcellshaveto onthee蕊ctofadhe