功能性细胞模子的建立及其在中草药研究中的应用.pdf

摘要 本文利用功能性细胞模型对中草药及其分离组分进行筛选分析，并用免疫荧光，蛋 cell responsepattem)技术上的功能性细胞模型不仅为中草药的活性筛选和功能预测提供了 一个很好的研究手段，也对中草药的开发应用具有一定的指导意义。鉴于中草药物种丰 富、成分复杂的特点，为了更好地研究中草药，建立多种反映不同细胞功能的细胞模型 也具有很大的价值，因此本文还基于该技术建立了肠道上皮屏障的细胞模型。主要内容 如下： 1．TCRP技术的原理及其用于细胞学研究的概况 基于微电子阻抗的实时细胞功能分析仪可以监测到特定的细胞对外界刺激时间剂 量依赖的反应，这项技术被称之为TCRP技术，本章主要对该技术的原理以及其在细胞功 能学上的研究进展做一综述。 factor growth 2．基于EGF／EGFR(Epidermalgrowthfactor／Epidermalreceptor)模型的怀山药抗 肿瘤活性研究 本文利用EGF／EGFR模型对大批量的中草药进行筛选分析得到山药是具有抑制 EGF信号功效的中药材之一。在山药分离的不同组分中，低极性组分具有明显的抑制 EGF信号的作用，并用蛋白印迹实验检测到该组分降低了EGF信号通路中一个重要蛋 白的磷酸化水平。另外还用顺铂诱导细胞凋亡的模型筛选了山药的不同分离组分，发现 可以有效降低顺铂IC50的有效部位也该极性段，由此我们推测山药提取物的低极性组 分可能具有抗肿瘤活性。 3．基于TCRP技术的肠道上皮屏障模型的建立 利用微电子传感器细胞实时分析仪动态监测肠上皮Caco．2细胞对乙醇刺激的反应 所得到的阻抗值的变化趋势与传统评价上皮屏障功能的跨上皮电阻法所得到TER图谱 非常吻合，免疫荧光图像显示细胞骨架蛋白F—actin与紧密连接蛋白ZO．1在乙醇的刺激 下同步发生定位的改变。另外，表皮生长因子EGF，一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂 在该系统上被检测出可以缓解乙醇对屏障的损伤，与前人的报道相一致，进一步证明了 利用这项基于微电子阻抗的动态检测体系来评价上皮屏障功能的可行性。该方法与传统 方法相比具有不需要标记，动态连续监测，高通量的优点，因此这个模型的建立为筛选 保护屏障药物搭建了一个很好的平台。 关键词：TCRP,细胞模型，山药，抗肿瘤，肠道上皮屏障，乙醇 II ABSTRACT functional Extractsanddifferentfractionsofnatural werescreenedand onthe products analyzed with biochemicalsuchas TCRP-basedcell the the of models，followed utility by interpretation techniques immunofluorescence．westerna1．TiffsmethodCallnot a for blot，et activity onlysupplygoodplatform direct and andfunctional ofnatural also its application screening predicti