候选基因ABCAl_G596A变异与冠心病发病关系.docVIP

候选基因ABCAl_G596A变异与冠心病发病关系 　　［摘 要］ 目的 探讨ABCA1_G596A基因变异与宁波地区汉族人群冠 心病发病的关系。方法 入选宁波地区行冠状动脉造影(CAG)检查的汉族人 群186例，其中冠心病组111例，非冠心病（对照）组75例。采用苯酚_氯仿_异丙醇抽提外周 血白细胞全基因组DNA,通过聚合酶链式反应（PCR)及限制性片段长度多态性（RFLP）结合测 序方法确定候选基因ABCA1_G596A单核苷酸多态性(SNPs)。结果 宁波地区 汉族人群ABCA1_G596A基因型GG、GA及AA分布频率依次为0.34、0.37及0.29。ABCA1_G596 A变异基因型GG、GA及AA携带者血浆HDL_c水平呈剂量依赖性升高（P＜0.01)，甘油三 酯 水平呈剂量依赖性降低（P＜0.05），而对血浆总胆固醇及LDL_c水平无影响。冠心病 组 与对照组之间ABCA1_G596A变异基因型频率分布无显著性差异（P＞0.05）。结 论 冠心病候选基因ABCA1_G596A变异对血脂代谢产生明显的影响，但与冠心病发 病无显著性关联。 　　［关键词］ 冠心病；血脂代谢；ATP结合盒转运体；单核苷酸多态性 　　中图分类号：R541.4 　　文献标识 码：A 　　文章编号：1009_816X(2008)01_0018_03 　　 　　冠心病CHD是威胁人类健康的重要疾病，其确切发病机制目 前仍不全清楚。近年来，高密度脂蛋白(HDL_c)低下在CHD发病中的作用已逐步得到共识 ［ 1～3］。HDL_c抗动脉粥样硬化的主要机制促进胆固醇逆向转运RCT。研究表明，ATP结合 匣式转运体(ATP_Binding Cassette Transporter 1, ABCA 1)基因调控的外周细胞胆固醇外流是影响RCT及HDL_c代谢的关键环节和限速步骤［4］。有研究认为，ABCA_G596A基因多态性不仅影响普通人群血脂代谢，而且对冠心病临床表 型具有重要的影响［5］。因此探讨ABCA1基因及其功能变异将有助于进一步揭示冠心 病发病机制。本文以宁波地区汉族人群为研究对象，探讨单核苷酸多态性(SNPs)ABCA_G596A 对血脂代谢及冠心病发病的影响。 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1.1 研究对象：病例入选采用序贯进入方法，选择宁波地区接受冠状动脉造影检查者186 例，均为汉族人群。其中确定为冠心病者111例，非冠心病者（对照组）75例。冠状动脉造 影显示至少一支冠状动脉主支狭窄程度≥50％者确定为冠心病，而主支血管狭窄程度均＜10 ％者为非冠心病（对照）组。入选者均采取空腹静脉血作血脂测定，包括总胆固醇(TC)、低 密度脂蛋白胆固醇(LDL_c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL_c）及甘油三酯(TG）均采用标化酶 法。排除2周内服用调脂药者及已知合并脑卒中及周围血管病但CAG正常者。两组病例临床情 况见表1。 　　 　　1.2 DNA提取：在接受CAG检查的同时采取外周静脉血20ml,置于酸性柠檬酸抗凝试 管，离心分离血浆与血细胞，于-80℃冰箱分装贮存。采用蛋白酶K消化、苯酚_氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取外周血白细胞全基因组DNA［6］。紫外线分光光度计定性 及定量检测DNA。DNA标本分储存液（200ug/ml)及工作液(15ug/ml），分别保存在-80℃及 4℃条件。 　　1.3 SNPs基因型检测：ABCA1_G596A基因型的检测采用聚合酶链式反应(PCR）结合限制性 片段长度多态性（RFLP）及测序等方法［7］。目的片段PCR引物为F:5_GTATTTTTGCAAGGCTACCAGTTACATTTGACAA3，R:5_GATTGGCTTCAGGATGTCCATGTTGGAA_3’。退火温度为50℃， PCR产物经内切酶EcoN I在37℃条件下孵育2小时。消化产物通过琼脂糖电泳分析。所得RFLP 进一步通过测序证实为SNPs，即G596→A变异。 　　1.4 统计学分析：采用SPSS 13.0软件进行统计分析。计量资料（血脂水平）用x－±s表示，计数资料用百分比表示。组间分析采 用用χ?2检验或ANOVA。双侧P＜0.05为差异有统计学意义。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1 基因频率及Hardy_Weinberg平衡检验：宁波地区汉族人群ABCA1_G596A变异三种基因型GG、GA及AA分布频率依次为0.34、0.37及0.29。根据Hardy_Weinberg平衡吻合度检验 ，提示本研究人群符合随机抽样，样本具有良好的代表性。 　　2.2 SNPs对血脂的影响：ABCA1_G596A基因型GG、GA及AA携带者血浆HDL_c呈现剂量依赖性 升高（GG：