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六味地黄汤生物制剂药理分析 　　【中图分类号】R917 【文献标识码】 A【文章编号】1672-3873（2011）03-0302-01 　　【摘要】目的研究经光合细菌代谢前后六味地黄汤对免疫力低下动物的药理作用。方法采用氢化可的松造成免疫力低下模型，观察六味地黄汤生物制剂和六味地黄汤分别对小鼠免疫器官、吞噬指数和迟发型变态反应的影响。结果六味地黄汤生物制剂能明显提高小鼠脾指数（P＜0.05），提高吞噬指数（P＜0.05），增强迟发型变态反应（P＜0.05），而同等剂量的六味地黄汤作用不明显。结论六味地黄汤生物制剂在增强免疫力方面优于传统的六味地黄汤水煎剂。 　　【关键词】六味地黄汤；光合细菌；免疫；小鼠；药理作用 　　 　　六味地黄汤由宋代名医钱乙首创，是中医著名的滋补肾阴传统代表方剂，方由熟地、山茱萸、山药（三补）和泽泻、丹皮、茯苓（三泻）所组成，主治肾阴不足证，从古到今在中医临床广为应用。光合细菌（PSB）是一种以光为能源的厌氧细菌，在自然界中的碳素循环和物质转化中起着重要作用，而且营养成分非常丰富，含有大量的蛋白质和氨基酸，是一种优质蛋白源，富含胡萝卜素，此外还含有多种生物活性成分。近年来由于发现 PSB含有丰富的营养药用成分及其独特的生物转化功能，在医药保健品方面的应用逐渐受到国内外研究者的关注。 　　本研究通过引入 PSB 生物发酵技术，探索性地研制了经 PSB 生物代谢后的新型六味地黄汤生物制剂（以下简称“生物制剂”），并以免疫力低下动物模型为基础，比较该生物制剂与传统的六味地黄汤水煎剂的药理作用。 　　1、材料 　　1.1药物和试剂氢化可的松，天津药业焦作有限公司，批号光合细菌，显微镜下观测含活菌数109 个。 　　六味地黄汤制备：取熟地黄 240 g，山茱萸 120 g，山药120 g，泽泻 90 g，牡丹皮 90 g，白茯苓 90 g，置于玻璃烧杯内，加入 5 倍蒸馏水浸泡 2 h ，文火煮沸 30 min，过滤。药渣再加 3 倍量水继续煎煮，煮沸20 min过滤。合并 2 次滤液，水浴浓缩至 1 500 ml，4℃ 冰箱保存备用。 　　1.2动物NIH 小鼠，体重 18～22 g，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：2005A011，正常饲养 3 d 后供试。 　　2、方法与结果 　　2.1对小鼠免疫器官的影响 　　取 NIH 小鼠，雌雄各半，随机分成 5 组，即正常组、模型组、六味地黄汤组、光合细菌组、生物制剂组。各组动物每天灌胃给予相应的药物 0.2 ml/10 g，正常组予以同容量的蒸馏水，1 次/d，连续 8 d 。与此同时，除正常对照组外，其余各组动物均同时皮下注射氢化可的松 40 mg/kg 以造成免疫力低下模型，1 次/d ，连续 8 d 。末次给药1 h 后脱臼处死动物，称取脾、胸腺重量，计算脏器指数，比较各组差异。结果见表1。表1 六味地黄汤生物制剂对小鼠免疫器官的影响（略） 　　结果表明，模型组免疫器官指数与正常组相比明显降低（P＜0.01），生物制剂和六味地黄汤能明显改善脾指数（P＜0.05），而对胸腺指数的影响统计学意义不明显。 　　2.2对小鼠非特异性免疫功能的影响 　　参考文献方法。取 NIH 小鼠，雌雄各半，按上述方法分组、造模、给药。于末次给药后1 h ，尾静脉注射印度墨汁 5 ml/kg体重，于注射后2 min 和 8 min 分别从小鼠眼底静脉丛取血20 μl，加入 0.1%碳酸氢钠溶液 2 ml 中摇匀。用 722 分光光度计测 680 nm 下光密度值（OD），分别以OD2 和OD8 表示 2 min 和 8 min 取样的光密度，以空白小鼠血与0.1% 碳酸氢钠溶液混合液调零点。最后处死小鼠，取脾脏和肝脏称重，按下列公式计算廓清指数K和吞噬指数α值。表2 六味地黄汤生物制剂对小鼠碳廓清能力的影响（略） 　　结果表明，模型组廓清指数和吞噬指数明显降低（P＜0.05），生物制剂能使廓清指数和吞噬指数增加（P＜0.05），使小鼠免疫力增强，而六味地黄汤在该实验条件下无此作用。 　　2.3对小鼠迟发型变态反应的影响 　　取NIH 小鼠，雌雄各半，按上述方法分组、造模、给药。给药后第10 天，腹部去毛约3 cm×3 cm，在去毛部位涂1%二硝基氟苯50 μl，于给药后第 14 天再以1%二硝基氟苯 10 μl 涂右耳，24 h 后处死小鼠，用 8 mm 打孔器打取两耳相同部位的耳片，称取重量，以左右耳片重量之差为肿胀度。 　　结果表明，生物制剂组的耳肿胀度显著高于模型组和传统六味地黄汤水煎剂组，而传统六味地黄汤在该剂量下并未体现作用。 　　3、 讨论 　　近年来生物技术在中药研究开发中已经显露出