六味地黄软胶囊及其各提取部位治疗更年期综合征实验研究.docVIP

六味地黄软胶囊及其各提取部位治疗更年期综合征实验研究 　　摘要：目的：观察六味地黄软胶囊及其各提取部位对更年期综合征动物的影响。方法：选用雌性SD大鼠，采用摘除卵巢方法复制更年期综合征模型，以六味地黄软胶囊及其各提取部位灌胃给药治疗15日，观察药物对模型动物的动情周期，血清中IL－2、LH、E2和FSH水平以及子宫、肾上腺、胸腺等脏器指数的影响。结果：六味地黄软胶囊及其乙酸乙酯提取部位可改善去卵巢大鼠的动情周期的变化，升高去卵巢大鼠血清IL－2和E2水平，降低LH水平，升高子宫、肾上腺及胸腺指数；正丁醇提取部位也可以改善去卵巢大鼠动情周期变化，降低血清IL-2水平。结论：六味地黄软胶囊对更年期综合征有治疗作用，其有效成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇提取部位。 　　关键词：六味地黄软胶囊；更年期综合征；去卵巢大鼠 　　中图分类号；11285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1848－03 　　 　　更年期综合征(climaetenie syndrome)，又称围绝经期综合征(penimenopause syndrome)，是由于卵巢功能退行性改变、脑垂体功能亢进、雌激素水平低下所导致的植物神经系统功能紊乱为主，伴有心理症状的一组症候群。90％的更年期妇女出现不同程度的临床表现。六味地黄方源自钱乙《小儿药证直诀》，临床研究表明六味地黄方具有良好的治疗更年期综合征作用。但是，对于六味地黄方及其有效成分对更年期综合征治疗的实验研究，本文利用六味地黄软胶囊，采用化学方法取得六味地黄软胶囊各提取部位，并就它们对更年期综合征模型大鼠的作用作一初步研究。 　　 　　1 实验材料 　　 　　1．1　实验动物　SD生育龄未孕雌性大鼠100只，体重250－280g,实验前置动物于室内适应环境1周，室温18－22℃。 　　1．2　受试药品与试剂　六味地黄软胶囊，由江苏康缘药业股份有限公司提供。取熟地黄、山茱萸等6味，用六味地黄软胶囊的制备工艺制成浸膏(每克浸膏含生药量为6.7g)，取浸膏约600g，水稀释到适宜浓度，用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次分步萃取3次，滤过，滤液低温挥干有机溶剂，60℃下减压干燥，分别得到各提取部位；剩余的残渣用水溶解，滤过，滤???水浴挥干，减压干燥得水提取部位。尼尔雌醇片(2mg/片)，上海华联制药有限公司；雌二醇(E2)放免试剂盒，促黄体生成激素(LH)放免试剂盒、促卵泡生成激素(FSH)放免试剂盒，天津德普生物技术和医学产品有限公司；白细胞介素－2(IL－2)放免药盒，解放军总医院科技开发中心放免所。 　　1．3　主要仪器　1470型Wizard全自动伽玛计数器，芬兰Pharmacia公司；DK－型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司；AR2140型电子分析天平，奥赛斯国际贸易(上海)有限公司；LDZ5－2型低速自动平衡离心机，北京医用离心机厂。 　　 　　2 实验方法 　　 　　2．1　动物模型制备　雌性SD大鼠，3％戊巴比妥麻醉(40mg/kg)，腹位固定。在最末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处，剪除长毛，切开皮肤和背肌约1.5－2cm，切口视野中可见一乳白色脂肪团，卵巢即包埋其中，结扎卵巢下输卵管，摘除双侧卵巢，术后将子宫角送回腹腔，缝合。正常对照组大鼠进行手术暴露卵巢但不切除。术后5日作阴道涂片，观察造模后动物动情周期，每天1次，连续5日．挑选不显周期性改变(即卵巢切除干净)的大鼠为造模成功的大鼠。 　　2．2　分组及给药　将造模成功的大鼠随机分为8组，每组10只。即假手术组、模型组、尼尔雌醇组(0.67mg/kg)、六味地黄软胶囊组、正己烷提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、水提物组(均为3g生药/kg)。手术后第9日，各组动物分别灌胃给予相应受试药物，尼尔雌醇组仅在第9日灌胃给药1次，假手术组和模型组灌胃给予等容积蒸馏水，给药容积为10mL/kg，每日1次，连续15日。 　　2．3　观察指标和测定方法　阴道涂片细胞学观察：于灌胃给药后第10日作阴道涂片观察大鼠的动情周期，用消毒棉签插入大鼠阴道约1－2cm，沿阴道壁旋转1圈取出，均匀涂于载波片上，稍风干后用10％甲醛溶液固定，HE染色后进行光镜检查，每日1次，连续4日。血清中IL－2、LH、E2、FSH水平测定：颈动脉取血，常规分离血清，放免法测定血清中IL－2、E2、LH、FSH含量。脏器指数测定：取血后断头处死大鼠，解剖取出胸腺、肾上腺和子宫，精确称重，按下式计算上述脏器指数：脏器指数=脏器重量(mg)/体重(g)。 　　2．4　统计方法　量反应资料用均数±标准差表示，统计方法为方差分析；质反应资料用X2(卡方)检验。实验资料采用SPSS10.0统计软件包处理。