食品安全国家标准4789标准修订（参与修订者讲解）.ppt

TSA： 25 ℃±1 ℃培养48 h±4 h * 黄色素 阴性对照E. coli ATCC 25922：白色菌落 典型ES：黄色 * 注：＋ ：90-100％；(＋) ：75-89%； V ：25-74％；(－)：10 -24％；－ ：0-9％ * 商业生化鉴定系统的应用 推荐使用的ES生化鉴定方法有很多，主要有API 20E，ID 32E，Biolog GN2 MicroPlate，VITEK GNI+等。 上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20E和Vitek GNI+。 API 20E生化鉴定板典型生化反应图示 * * 第二法 阪崎肠杆菌MPN法检验程序 谢　谢 yunchangguo2006@ * * * 那么现在这个方法与原4789.3标准相比有那些不同呢。 ★ ★ ★ 首先是操作步骤不同。 原方法 ★ ★ ★ 用的三步法，检样稀释液接种乳糖胆盐发酵管进行初发酵实验，将产酸产气管接种EMB平板进行分离培养，然后挑选可疑菌落进行革兰氏染色和乳糖发酵管复发酵，查表报告结果。 而 ★ ★ ★ 现方法用的是两步法。检样稀释液接种月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤LST进行初发酵实验，将产酸产气管接种煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB），进行验证实验，查表报告结果。 从这里我们可疑看出 ★ ★ ★ 原方法的操作步骤要复杂一些，特别是在 ★ ★ ★ 分离培养阶段。 按照标准规定，要选取1-2个可疑菌落进行革兰氏染色和乳糖发酵管复发酵这两个方面的鉴定。标准中对所挑选的菌落数量的要求是比较低的，检验者在挑选菌落时都会尽量挑选最典型的菌落，但是根据文献报道，有大约3%的大肠菌群细菌可以EMB平板上形成非典型菌落。另一方面，形成典型菌落的也不一定就是大肠菌群的细菌。所以，原方法对检验者的经验要求也比较高。 而 ★ ★ ★ 现方法操作就简单了一些，受检验者人为因素的影响也相对地小一些。更重要的，这个方法是目前国际通用的方法，比如，ISO，FDA，AOAC，北欧，加拿大等权威标准，都是采用的这个方法。4789标准进行这样的修改，也有采用国际先进标准、与国际标准接轨的考虑。 现标准与原4789.3的再一个不同，就是★ ★ ★ * 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤 ，又叫十二脘基磺酸盐胰蛋白胨肉汤，英文缩写LST肉汤。 LST肉汤 是国际上通用的培养基。与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更好些。 还有就是LST更容易观察。 * 这分别是未接种检样时的LST肉汤和乳糖胆盐肉汤。左边 ★ ★ ★ 3 管浅黄色的是LST，右边 ★ ★ ★ 3管紫色的是乳糖胆盐肉汤 * 这是进行同样的接种和培养后的的LST肉汤和乳糖胆盐肉汤。同样也是 ★ ★ ★ 左边LST， ★ ★ ★ 右边是乳糖胆盐肉汤。 ★ ★ ★ 可以观察到细菌生长和倒管中的产气情况。 刚才我们已经谈到，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，乳糖胆盐肉汤中的选择性抑菌剂是胆盐。由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难。 从这个照片上，我们也可以看出来，在同样的接种和培养条件下，左边的LST更容易观察一些。 * 这是标准中所给出的MPN表，这张幻灯片里只显示出了部分内容，这个表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准所通用的MPN表。至于为什么都使用这个MPN表，所有MPN方法的ISO标准里都无一例外地给出了他的参考文献。—— De Man, J. C. MPN table, corrected. Eur. J. Appl. Biotechnol., 17, 1983, pp. 301-305. 在使用这个表的时候，请注意，表里的数字是有小数点的 ★ ★ ★。 比原4789.3中的MPN表也要简化一些。原标准把一些不可能出现的阳性管组合列上去了。而且可能是为了使结果不出现小数点，对表中数字进行了四舍五入的处理，并将报告单位定为每100克/ml。对MPN这么处理，好象是中国特色。 在所有MPN法的ISO标准里都提醒检验者，MPN法的结果可能会存在较大差异，应谨慎使用通过该法所获得的结果数据。所以说原4789.3MPN表中一些数字别说不可能出现，就算是出现了，也是不可接受的结果。检验者应该对检验过程进行分析，是不是样品过酸或过碱、是不是含有抑菌物质，操作是否有误？等等 2.1原国