体外放射分析（检验）检验核医学.ppt

第四章 体外放射分析 教学目的 掌握体外放射分析的原理（RIA、IRMA） 掌握RIA与IRMA的异同 掌握RIA、IRMA的基本操作程序 掌握RIA、IRMA的基本试剂 了解体外放射分析试剂的要求 体外放射分析B与F的常见分离方法 重难点 重点： 1、RIA、IRMA的原理 2、RIA、IRMA的异同点 难点： 1、RIA的原理 一 体外放射分析的概述 （一）特异性结合 1、抗原与抗体 2、配体与受体 3、底物与酶 4、激素与血浆结合球蛋白 （二）结合反应动力学规律 [L]+[B]=[LB] 1、竞争性结合分析 [L]+[*L]+[B]=[LB]+[*LB] 2、非竞争性结合分析 Sp.Ab1+Ag=SpAb1.Ag+*Ab2=Sp.Ab1. Ag.*Ab2+*Ab2 （三）放射性测量 放射性测量是定量的基础 第一节 放射免疫分析radio innumo assay,RIA 竞争放射分析 放射免疫分析 （Radio Immuno Assay, RIA） 竞争性蛋白结合分析 （Competitive Protein Binding Assay, CPBA） 放射受体分析 （Radio Receptor Assay, RRA） （一）放射免疫分析原理 *Ag+Ag+Ab =(*Ag—Ab)+(Ag—Ab)+*Ag + Ag 0 Max Min ? ? ? 条件： 1、 *Ag定量、足量 2、 Ab限量 *AgAb 专用符号： 1、T (Total): 加入的*Ag的放射性计数 2、B (Bound): *Ag—Ab免疫复合物的放射性计数 3、B0 Ag=0时*Ag—Ab放射性计数 4、F (Free): 游离的*Ag的放射性计数 T=B+F 5、NSB(Non-specific binding): 非特异性结合产生的放射性计数 6、结合率：B/T、B/B0、B/F （二）RIA的三种基本试剂 标准品（Ag） 标记物（ *Ag） 抗体（Ab） 放 射 性 免 疫 及 免 疫 放 射 分 析 试 剂 盒 1、标准品 化学结构： 应与被测物具有相同的化学结构 化学纯度： 纯品 化学度量： 准确 稳定性： 保持生物活性不变 2、标 记 物 要求： 1、较高的比活度 2、生物活性与免疫活性：与标记前一致 3、放射化学纯度：95% 4、稳定性 鉴定： 1、最大结合率 2、标准曲线比较法 3、稀释曲线比较法 3、抗体 要求： 　　1、亲和力 2、高滴度 　　 3、特异性 4、可长期保存 抗 体 抗原 动物选择 佐剂 免疫动物、收获鉴定抗体 抗血清的鉴定 亲和力： 指抗体与抗原的结合能力，常用平衡亲和常数KA表示。 特异性： 抗体与相应抗原的结合能力与其它类似物结合能力的比较，常用交叉反应率（Cross Reaction）表示 交叉反应率=Y/Z×100% Y：标准抗原取代50%结合率所对应的浓度 Z：类似物取代50%结合率所对应的浓度 滴度： 结合50%标记抗原时血清的稀释度 单 克 隆 抗 体 特点： 特异性高 抗体成分专一 可反复制备 制备： 1、免疫小鼠，制备脾细 胞悬液 2、选择培养，用HAT培 养基筛选杂交瘤细胞 3、检测抗体 4、克隆化 （三）分离方法 1、分离方法的要求 1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开 2、分得的成分便于作放射性操作 3、分离效果不受外界干扰因素影响 4、操作简便、分离迅速、重复性好 5、试剂来源广泛、价廉易得 2、常用的分离方法 聚乙二醇法（PEG） 活性炭吸附法 盐析法 微孔滤膜法 双抗体法 SPA法 固相抗体法：塑料