吉林农大动物生化第4章核酸化学PPT课件.ppt

第 四章 核酸化学 Structure and Function of Nucleic Acid 复制 转录 翻译 DNA DNA RNA 蛋白质 一、 元素组成 修饰糖 4、体内重要的游离核苷酸及其衍生物 二、核酸的一级结构 核酸分子中核苷酸（碱基）的排列顺序。 二、? 核酸的紫外吸收 碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有强烈的光吸收，最大吸收峰为260nm。 λmax=260nm (一) 变性(denaturation) DNA的热变性 将DNA稀盐溶液加热到80-100℃几分钟，双螺旋结 构即发生破坏，氢键断裂，两条链彼此分开，形成 无规则线团状结构。 影响DNA的Tm值的因素 (二) ? 复性(renaturation) 相同或不同来源的DNA分子间或DNA和RNA分子间，如果含有彼此互补的序列，通过变性和复性处理，DNA－DNA同源序列间及DNA－RNA异源序列间都可形成DNA-DNA杂合体或DNA－RNA杂合体，称为～。 根据核酸分子杂交的原理，人工制备或从基因组中分离一段已知序列的DNA，使之带上标记，经变性后形成单链，在一定条件下与待测DNA单链杂交，如两者序列有同源性，可形成带有特定标记的双链DNA分子，以达到探测未知DNA的目的，此即核酸探针或基因探针。 RNA的种类、分布、功能 RNA分子主要由AMP，GMP，CMP，UMP四种 核糖核苷酸组成。RNA的一级结构就是指 RNA分子中核糖核苷酸的排列顺序及连接 方式。 二、RNA的一级结构 1、真核生物 mRNA一级结构特点 （1）. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2也是甲基化，形成帽子结构：m7GpppNm。 （2）. 大多数真核mRNA的3′末端有一个长约30～200个核苷酸残基的多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾（polyA)。 帽子结构 2、tRNA的一级结构特点 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C N,N二甲基鸟嘌呤 N6-异戊烯腺嘌呤 双氢尿嘧啶 4-巯尿嘧啶 稀有碱基 三、RNA的二级结构 单链局部回环结构（发夹结构） * tRNA的二级结构 ——三叶草形 氨基酸臂 二氢尿嘧啶环（DHU环）8～12个核苷酸 反密码环 7个核苷酸 额外环（可变环、附加叉）4～21个核苷酸 TΨC环 7个核苷酸 * tRNA的二级结构 ——三叶草形 氨基酸臂 DHU环 反密码环 额外环 TΨC环 氨基酸臂 额外环 氨基酸臂 可变臂 DHU臂 反密码臂 TψC臂 * tRNA的三级结构 —— 倒L形 * tRNA的功能 活化、搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。 （二）RNA的三级结构 核 酸 的 性 质 Characters of Nucleic Acid 第 五节 目 录 一、核酸的一般理化性质 1、大分子性质：核酸的分子量很大，一般为106～1010。核酸溶液粘度大。 2、溶解性：核酸微溶于水，不溶于有机溶剂。 3、核酸的酸碱性质 核酸中的磷酸和碱基均能发生两性解离。核酸是两性电解质。具有酸性。 DNA等电点 4—4.5；RNA 等电点 2—2.5 二、颜色反应 1、DNA H+ 苔黑酚 H+ 二苯胺 脱氧核糖 ε-羟基γ-酮基戊醛 蓝色 △ H2O △ 2、RNA 核糖 糠醛 绿色 △ 3H2O △ 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0若溶液中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低。 3