对血管新生和肝癌诱导的血管新生的抑制作用.ppt

EndoStar Endostar对血管新生和肝癌诱导的血管新生的抑制作用 南京八一医院全军肿瘤中心 先声药物研究有限公司 叶庆 秦叔逵﹡ 殷晓进﹡ 李慧 丰俊东 吴穷 曲文书 新生血管形成的步骤： 研究背景： 血管内皮抑素是ⅩⅧ型胶原C－末端的氨基酸片段，通过体内、外研究表明其能特异性地抑制血管内皮细胞的增殖并能抑制毛细血管的生长。 美国哈佛大学医学院Judah Folkman 教授认为当实体瘤生长超过1mm3 时,即需要新生血管来维持肿瘤的生长并促使其转移。 肝癌是一种富血管肿瘤，肝癌通过诱导丰富新生血管来促进其生长、转移和复发。 研究背景： 实验方案： 体外实验 体内试验 侵袭 趋化和迁移 粘附 增殖 小管形成 Metrigal 栓 Endostar对HUVEC的影响 Endostar对肝癌诱导特异性血管形成的影响 血管内皮抑素能否以及如何影响 血管新生 肝癌诱导的特异性血管新生 血管内皮抑素用于治疗和预防肝癌的转移和复发提供试验及理论依据 研究目的： Endostar对血管新生的抑制作用 Endostar对HUVEC趋化和迁移的影响 划痕试验： 迁移小室： VEGF能诱导HUVEC的趋化和迁移 Endostar能够抑制VEGF诱导HUVEC的趋化和迁移 在浓度为50ng/ml和500ng/ml时效果最明显 Endostar对HUVEC粘附的影响 Endostar能够抑制HUVEC粘附作用，在浓度50ng/ml-5000ng/ml间，具有浓度依赖性 Endostar对HUVEC增殖的影响 1) MTS法： ng/ml 500,000 50,000 5000 500 50 5 0.5 0.05 0.005 0.0005 0.00005 24h 0.1965 0.1634 0.2251 0.1735 0.2411 0.1084 0.0173 -0.0241 0.1021 0.159274 0.145186 48h 0.3389 0.2107 0.1977 0.1643 0.0851 0.0734 0.1375 -0.035 0.1278 0.0440 0.0376 72h 0.1710 -0.041 -0.018 -0.049 -0.039 -0.100 -0.17 -0.137 -0.072 -0.188 0.0467 Endostar作用于HUVEC 24h和48h 时，大多浓度有效 2)CFSE荧光染色法： Endostar浓度在50ng/ml～5000ng /ml间，能够抑制HUVEC的增殖，其抑制作用具有浓度依赖性 Endostar对HUVEC小管形成的影响 Endostar能抑制HUVEC形成管型，在浓度为50ng/ml～5000ng /ml间，500ng/ml抑制作用最强 500ng/ml Endostar＝0 50ng/ml 5000ng/ml 动物水平实验 Matrigel 胶栓实验 小 结 Endostar在细胞水平能抑制HUVEC与血管形成相关的生物学行为，包括HUVEC的趋化、迁移、粘附、增殖和小管形成；在动物水平能抑制血管形成，据此推断Endostar能抑制血管形成 Endostar对肝癌诱导的 血管新生的抑制作用 肝癌细胞对HUVEC趋化和迁移的影响 肿瘤条件培养基能够比正常肝细胞培养基更能诱导HUVEC的趋化和迁移运动 Endostar对肝癌细胞诱导的HUVEC趋化和迁移的影响 Endostar能够抑制肝癌条件培养基诱导HUVEC的趋化和迁移运动，在浓度为50ng/ml和500ng/ml时效果最明显 HUVEC对肝癌细胞的粘附作用 肝癌细胞较正常肝细胞容易粘附HUVEC Endostar抑制肝癌细胞对HUVEC的粘附作用 Endostar在50ng/ml-5000ng/ml之间能抑制HepG2对HUVEC的粘附作用，并具有浓度依赖性 肝癌细胞对HUVEC增殖的影响 CFSE/PKH-26荧光染色： Proliferation index 0.2%BSA+SFM TCM NCM HUVEC 1.53 1.43 1.38 HUVEC+HepG2 2.68 2.66 HUVEC+L02 2.54 2.42 Proliferation index 排序：HUVEC+ NCM (1.38) HUVEC+ TCM (1.43) HUVEC+L02+NCM (2.42)