病理切片技术学术报告PPT课件.ppt

病理切片技术;目录;一、取材;取材工具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。 ;标本的选取：应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊目的者应属例外。;二、固定;3.固定的注意事项 ;4.固定液的使用 ;冲洗 组织经过固定后，脱水之前应进行冲洗，将组织内的固定液洗干净，否则残留组织内的固定液有碍制片和染色，而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作用，以至于损坏组织，给制片工作带来不利。在冲洗时，冲洗剂的选择应依固定液的种类和性质而有所不同。;冲洗时应注意以下事项： 水溶性的固定剂：需用流水冲洗。 酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。 含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗。 含有升汞固定剂：水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。 含有铬酸的固定剂：冲洗时置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。;三、脱水;1.常用的脱水剂 ;2.组织的摇震 ;四、透明;透明剂 二甲苯：能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。 对组织的收缩性强，作用迅速，组织在二 甲苯中时间不宜过长 。(常用) 氯 仿：作用缓和 ，不易呈现透明现象 香柏油：处理细柔组织的最佳透明剂 。;五、浸蜡;六、包埋;1.石蜡包埋法;3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。 4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。 5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。;2.石蜡包埋流程;100％酒精（Ⅰ）2－4小时。 100％酒精（Ⅱ）2小时。 二甲苯（Ⅰ）0.5－1小时。 二甲苯（Ⅱ）0.5小时。 浸蜡（Ⅰ）2小时。 浸蜡（Ⅱ）2小时。 组织包埋。（上述只供参考）;七、切片;1.切片前???准备;2.切片的步骤;摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。 实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。 切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。;3.注意事项;4.贴片;待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份时用毛笔，拨正切片位置。如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列应密集、整齐。 用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号 将附贴好的切片置于恒温箱内干燥（温度一般高于石蜡熔点2-4 ℃ ）;八、染色;1.染色过程;95％乙醇1 1-2分钟 95％乙醇2 1-2分钟 100％乙醇1 1-2分钟 100％乙醇2 1-2分钟 二甲苯1 1-2分钟 二甲苯2 1-2分钟 树胶封片 ;常规苏木素-伊红染色HE;1克苏木素溶于10毫升无水酒精中；另将20克钾明矾加热溶于200毫升蒸馏水。二者混合煮沸，玻棒搅拌加0.5克氧化汞，流水冷却，隔夜过滤。;脱蜡 二甲苯1 2分钟 二甲苯2 2分钟 95％乙醇 1分钟 95％乙醇 1分钟 自来水洗 片刻;染色： 苏木素浸染 4-10分钟 自来水洗 片刻 1％盐酸乙醇分化 3-5秒钟 自来水冲洗 片刻-数小时 饱和碳酸锂溶液 1分钟 自来水冲洗 15分钟 0.5％伊红酒精浸染 1-2分钟;脱水，透明，封固 95％乙醇1 1-2分钟 95％乙醇2 1-2分钟 100％乙醇1 1-2分钟 100％乙醇2 1-2分钟 二甲苯1 1-2分钟 二甲苯2 1-2分钟 树胶封片。 结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈桔红色，其它成分呈深浅不同红色。 ;弹性、胶原纤维的双重组合染色法;将维多利亚蓝2克，糊精0.5克，间苯二酚4克，蒸馏