第二章 植物组织培养基本技术PPT课件.ppt

第二章 植物组织培养的基本技术;第一节 培养基及其配制;1.大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元 素，包括：N、P、K、Ca、Mg、S等。 N：在制备培养基时以NO3-N和NH4-N两种形 式供应。常用含N物质有KNO3、NH4NO3、 (NH4)2SO4 P：常用的物质有KH2P04或NaH2P04等。 K：常用的物质有KCI、KN03、 KH2P04 Ca、Mg、S： MgSO4·7H20、 CaCl2·2H2O ;2、微量元素：指小于0.5mmol／L的元素，包括 Fe，B，Mn，Cu，Zn，Mo，Co等。 Fe：常用FeSO4·7H20，因其在pH值5.2以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀，通常FeSO4·7H20 和Na2—EDTA结合成络合物使用。 B：H3BO3 Mn，Cu，Zn：常用其硫酸盐； Mo：Na2MoO4 Co: CoCl2;（三）有机营养物质： 培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basic medium)。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类：;1、碳水化合物——碳源： 可作为碳源的有蔗糖，葡萄糖和果糖最常用的碳源是蔗糖，蔗糖使用浓度在2%—5%，常用3%（30g/L），即配制一升培养基称取30g蔗糖，有时可用2.5%。;5.天然有机附加物：如椰汁、香蕉汁、马铃薯汁、酵母提取液等。 （四）植物生长调节剂： 1、生长素类： （1）组培中的作用： ①促进细胞伸长； ②促进生根； ③诱导愈伤组织的形成； ④2,4-D会诱导某些植物不定胚的形成。;（2）常用的生长素：吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D） （3）常用浓度：0.1~5.0mg/L （4）需注意的问题： ①IAA稳定性差——过滤灭菌，避光保存； ②生长素与细胞分裂素（CTK）配合使用：IAA/CTK比值高，促进根的分化；IAA/CTK比值低，促进芽的分化；IAA/CTK比值始终，形成愈伤组织，不分化 ③ 2,4-D可有效诱导愈伤组织的形成，但对芽的形成具有抑制作用，且使用浓度范围较窄，稍过量对植物组织有毒害作用； ④诱导分化、增殖和生根阶段一般选用IBA和NAA;2.细胞分裂素（CTK）： （1）作用： ①促进细胞分裂； ②诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长； ③抑制顶端优势，延缓离体组织衰老； ④对根的生长一般起抑制作用 （2）常用的细胞分裂素：6-苄基腺嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素（ZT）等。 （3）使用浓度：一般0.1~10.0mg/L;3.其他生长调节剂： （1）GA：赤霉素 ①作用： a.促进幼苗茎的伸长和不定胚发育为小植株 b.与生长素协同作用，对形成层的分化有影响： IAA/GA比值高时，有利于木质部分化 IAA/GA比值低时，有利于韧皮部分化 c.打破休眠 d.抑制器官和胚状体的形成，但二者形成后，又可促进其生长 ②常用浓度：0.1-0.5mg/L;（2）ABA：脱落酸 a.促进胚状体的发生 b.促进胚状体发育成熟但不萌发 （五）凝固剂：琼脂、卡拉胶等 浓度：一般0.4%~0.7% （六）其他物质 1.活性炭（AC）：防止外植体褐变；降低玻璃苗的产生率；有利于生根，一般0.5%~3% 2.抗生素： 3.抗氧化物质;三、培养基的类型及特点;2.White培养基：其特点是无机机盐数量较低，适用于生根培养，胚胎培养及一般的组织培养也可以用，应用较广泛。 3.B5培养基：其主要特点是含有较低的铵，较高的硝酸盐和VB1，铵对植物的生长有抑制作用。木本植物尤其适宜在B5培养基上生长。 4.N6培养基：其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高，广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。;三、培养基的配制;2、配制母液的注意事项： （1）配制无机盐母液要防止混合各种盐时产生沉淀，各种药品必须在溶解后才能混合，而且要注意先后次序，把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根、磷酸根错开，以免相互结合生成沉淀。 另外，在混合各种无机盐时，稀释度应大，混合要慢，注意搅拌。 ;（2）在配制微量元素母液时也应注意药品的添加顺序，以防止沉淀的产生。 （3）铁盐由于易被氧化，易与其他混合液产生沉淀，因此铁盐应与Na2-EDTA混合配制成螯合铁。 （4）有些生长调节物质不溶于水，2,4-D 、NAA 、IAA 、GA3等在配制时可先用少量95%的乙醇溶解。KT、6-BA等可先溶解于少量1mol/L的盐酸中。叶酸则可先用少量稀氨水溶解。;3、配制好的母液贴上标签 标签：注明母液的名称、配制倍数、配制日期、配制人员及配1L培养基时应移取的