答辩PPT（铁皮石斛多糖）PPT课件.ppt

组培铁皮石斛多糖的提取及其抗氧化性研究(1);目录; 1.组培铁皮石斛多糖简介及国内外研究现状; 1. 2铁皮石斛国内外研究现状; （3）购买已有技术，做成中成药。小规模临床试验证明，在化疗及治疗心血管疾病方面，铁皮石斛中成药辅助疗效十分显著。以片剂口服方式，可部分替代扩张血管的西药烟酸注射液。 随着功能开发和应用技术的不断发展，需求量在不断上升，目前是国内近百种药品和保健品的必需原料，全国涉及用到石斛类的制药厂和保健品加工企业有100多家。铁皮石斛主要的消费市场在我国的浙江和上海一带，另外就是港澳和东南亚地区，北京、广州、成都等地近几年市场发展较快，从我国石斛联盟发布的市场信息来看，铁皮石斛的市场和销售都在快速发展。 从相关信息来看，目前世界中草药市场销售额为160亿美元，而且每年正以20~30％的速度增长，而我国的中草药产业占整个医药市场的40％左右，近五年来以年平均20％的高速度递增，铁皮石斛所占中草药产业比例越来越高。 ;3.试验方法和内容; 3. 1.2 操作要点 (1) 破碎：组培石斛苗要充分的研磨破碎，有利于多糖的溶解分离。 (2) 提取：破碎的石斛组织于90℃、料水比1:20的条件下回流提取1小时，重复三次，合并提取液。 (3) 脱脂：浓缩液中加入100 mL石油醚水浴回流至沸腾，抽真空过滤。 (4) 脱蛋白：以50 mL多糖浓缩液，15 mL氯仿，5 mL正丁醇为标准比例混合振荡，不加热，离心机离心至离液面交界处无白色混悬物，也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可，并分别提取。 ; (5) 干燥：脱色后的多糖液于烘箱中用60℃热风干燥至恒重，保存备用。 3. 2 组培铁皮石斛多糖含量的测定 试验采用蒽酮硫酸法测定组培铁皮石斛多糖含量。 3.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称取经105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.05g（精确到0.0001g），用温蒸馏水溶解，并定容至1000 mL。此溶液质量浓度为50μg·mL-1。分别取上述葡萄糖溶液0 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL到25 mL具塞试管中，用蒸馏水补足到2mL；在冰水浴中加入4 mL的2g/ mL的蒽酮-硫酸溶液??摇匀，置于沸水中加热煮沸5min，取出后用流动水冷却至室温，以零管为空白，于625nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，对应吸光值为纵坐标建立标准曲线，如下图所示。 ; 3.2.2 组培铁皮石斛多糖含量的测定 分别取组培铁皮石斛多糖储备液(50μg·mL-1)和组培铁皮石斛苗储备液(50μg·mL-1)1.6mL到25mL具塞试管中，用蒸馏水补足到2mL；在冰水浴中加入4 mL的2g/ mL的蒽酮-硫酸溶液，摇匀，置于沸水中加热煮沸5min，取出后用流动水冷却至室温，以葡萄糖样品中零管为空白，于625nm处测定吸光度。由标准曲线求得对应的多糖浓度，以葡萄糖计。 ; 3.3 FRAP法测定组培铁皮石斛的总抗氧化能力 3.3.1 硫酸亚铁标准曲线的绘制 取不同体积5～140μL的1mmol/LFeSO4 溶液，用蒸馏水补足至2mL，再加入配制好的FRAP工作液3mL，混匀后于37℃反应30min，在593nm下测定样品液的吸光度值，确定还原力标准曲线。 以吸光度（Y）对葡萄糖质量浓度（X）回归，得到回归方程y = 0.0516x - 0.0041，所得葡萄糖标准曲线如下图1所示。 ; 3.3.2 组培铁皮石斛多糖总抗氧化能力的测定 分别精密移取不同样品质量50～300μg的3种待测样品加入到有刻度试管中，加蒸馏水至2mL，再加入FRAP工作液3mL，混匀后于37℃反应30min，取出后立即在593nm处测定吸光度。以不加样品组为参照，测定样品吸光度值，每个样品平行测3次，取平均值。根据还原力标准曲线，计算相同吸光度值的FeSO4当量浓度，记为FRAP值。 3.4 组培铁皮石斛多糖清除羟基自由基的能力 根据Fenton反应的方法，建立·OH自由基产生体系模型。 在刻度试管中加入5mL的蒸馏水,30μL的0.02mol/L的FeSO4,100μL0.01 mol/L水杨酸,最后加入25μL0.02 mol/LH2O2启动反应, 放置37℃水浴保温反应3