感染病学基础-病原学诊断.pptx

病原学诊断Diagnostic microbiology;内容 Contents;1674，Antony Van Leeuwenhoek借助自制透镜发现微小生物体 1859, Louis Pasteur制备液体培养基 1881, Koch和Hesse制备固体培养基 1949, John Franklin Enders建立动物细胞培养技术 ……;（1）目的：直接检测微生物（细菌、真菌、寄生虫虫卵幼虫和成虫、感染的细胞中的病毒包涵体）;初步或明确鉴定微生物;（2）技术：;普通光学显微镜术(Brightfield or light microscopy)： 细菌染色标本 活菌运动 大的微生物如寄生虫和真菌 病毒感染的病变细胞和包涵体 组织病理;暗视野显微镜术(Darkfield microscopy) ： 不染色活菌 螺旋体及其动力;荧光显微镜术(Fluorescent microscopy) ： 各种微生物用荧光素标记后发出荧光;相差显微镜 术(Phase-contrast microscopy) ： 可观察到微生物的内部结构;电子显微镜术（Electron microscopy) ： 常用做研究工具 直接观察到高浓度液体中的病毒颗粒的形态和大小、低浓度液体可离心后收集沉淀观察或免疫电镜观察 微生物的超微结构;（3）检查方法：;（1）成功取决于： 微生物的生物学特性 感染的部位 患者对感染的免疫反应 适宜培养基（三种类型）和条件;培养基类型（细菌和真菌）;培养基类型（衣原体、立克次体和全部病毒）：细胞培养;（1） 分子种类： DNA RNA 蛋白质 （2） 优势： 适宜于不能分离或免疫学检查的微生物检查； 检测基因型或突变（eg.耐药） 敏感、特异和安全；;Restriction fragment length polymorphism（RFLP，限制性片段长度多态性） distinction of DNA from bacterial strains separated by pulsed-field gel electrophoresis. Lanes 1 to 3 show Sma 1 restriction endonuclease-digested DNA from bacteria from two family members with necrotizing fasciitis and from their physician (pharyngitis). Lanes 4 to 6 are from unrelated Streptococcus pyogenes strains;DNA probe（DNA探针） analysis of virus-infected cells. Such cells can be localized in histologically prepared tissue sections using DNA probes consisting of as few as nine nucleotides or bacterial plasmids containing the viral genome. A tagged DNA probe is added to the sample. The appropriate substrate is added to color the nuclei of virally infected cells.;In situ localization（原位杂交） of cytomegalovirus (CMV) infection using a genetic probe. CMV infection of the renal tubules of a kidney is localized with a biotin-labeled, CMV-specific DNA probe and is visualized by means of the horseradish peroxidase-conjugated avidin conversion of substrate, in a manner similar to enzyme immunoassay.;多聚酶链反应;DNA chip （基因芯片） 16srRNA测序或全基因组测序 蛋白组和质谱;检测和定量抗原 评价抗体反应 评估是否暴露或免疫接种;Analysis of antigens and antibodies by immunoprecipitation（免疫沉淀）;Immunofluorescence and enzyme immunoassays for antig