分子标记技术的类型原理及应用ppt课件.ppt

3.通过接头序列和PCR引物3’末端的选择性碱基的识别，扩增那些两端序列能与选择性碱基配对的限制性酶切片段； 4.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，将特异的限制性片段分离开来； 5.然后利用成像系统和分析软件检测凝胶上DNA指纹的多态性。 应用 AFLP作为一种高效的指纹技术，已在遗传育种研究中发挥它的优势。 在医学、农业、林业、畜牧业、渔业等领域中得到了广泛的应用。 扩增片段长度多态性(AFLP) 优点 高度特异性，实验周期短， 可信度高，检测速度快。 缺点 技术过程复杂，实验成本较高， 且受专利保护。 扩增片段长度多态性(AFLP) SNP主要是指在基因组水平上由于单个核苷酸的变异所引起的DNA 序列多态性。也即SNP 是同一物种不同个体间染色体上遗传密码单个碱基的变化。 主要表现为基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性，包括单碱基的转换或颠换、以及单碱基的插入或缺失等。 单核苷酸多态性标记(SNP) 单核苷酸多态性标记(SNP) 原理： SNP 与RFLP及SSR 标记的不同有2 个方面：其一，SNP 不再以DNA 片段的长度变化作为检测手段，而直接以序列变异作为标记； 其二，SNP 标记分析完全摒弃了经典的凝胶电泳，代之以必威体育精装版的DNA 芯片技术。 对成千上万个克隆测序，用计算机分析数据和显示最终结果。 检测 DNA芯片技术，必威体育精装版报道的微芯片电泳(Microchip electrophoresis) ，可以高速度地检测临床样品的SNP。 杂交型芯片将等位基因特异寡核苷酸共价固定在载体表面，用荧光标记引物扩增基因组DNA，再与芯片上的寡核苷酸杂交形成信号，并行读取芯片上不同SNP 荧光信号，获得SNP 信息。 单核苷酸多态性标记(SNP) 应用 种群生物学特征、遗传性疾病检测、疾病关联分析及特定功能基因或片段的分型等研究，在基因组作图和数量性状定位等方面也有越来越多的应用。 优点 数量多，分布广泛，检测快速、 易于实现自动化，遗传稳定性高。 缺点 成本高，错误信号多。 单核苷酸多态性标记(SNP) ESTs( Expressed Sequence Tags)是在人类基因组计划实施过程中，由美国国立卫生研究院生物学家Venter J提出的发现基因的新战略。 ESTs是指从cDNA文库中随机挑取克隆并对其3’或5’端进行单轮测序所获得的短cDNA序列，一般长度为300~500bp。 表达序列标签标记技术(EST) 原理 由于ESTs是短的核苷酸序列，而且根据构建文库时所采用引物的差异，所测定的序列可以是cDNA的各个区段，包括5’末端和3’末端，以及5’上游非翻译区( UTR)和3’UTR，也可以是cDNA的任何内部序列。因为cDNA来源于mRNA, 所以每一个EST’均代表了文库构建原组织的基因组DNA中一个表达基因的部分转录片段。 表达序列标签标记技术(EST) 数据库 目前常用的含有ESTs子数据库的有： NCBI的GenBank； 欧洲分子生物实验室的EMBL； 日本国家数据库DDBJ。 应用 构建遗传学图谱、分 离与鉴定新基因、 基因差异表达的研究、基因的定位克隆 用于制备cDNA芯片等。 表达序列标签标记技术(EST) 优点 数量多，分布广泛，检测快速、 易于实现自动化，遗传稳定性高。 缺点 获得的基因组信息不全，费用高， 对DNA质量和cDNA文库要求高。 表达序列标签标记技术(EST) 复旦大学 复旦大学 复旦大学 分子标记技术 姓 名：赵 淑 莉 学 校：吉林大学 主要内容 类 型 2 原理及应用 3 4 1 概 述 致 谢 概 述 分子标记技术(Molecular Markers) 1974年,Grozdicker 等人在鉴定温度敏感表型的腺 病毒DNA突变体时， 利用限制性内切酶酶解后得到 的DNA片段的差异，首创了DNA分子标记。 所谓分子标记是根据基因组DNA存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记,它是继形态学标记、细胞学标记、生化