分子生物学技术介绍课件.ppt

实验基本技术 分子生物学部分 存在问题 1. 基本的实验技能 2. 实验习惯 3. 责任感和安全性 核酸纯化技术 离心分离技术 凝胶电泳技术 核酸定量技术 分子杂交技术 序列分析技术 ……………… 一 核酸纯化技术 方法 样品+等体积饱和苯酚 10kb以上轻柔混匀；10kb以下振荡 离心（12000*g） 取上清 核酸相 Protein变性相 有机相 二 离心技术 原理 离心力：F= ω 2rm RCF=F/G= ω 2r/g =（2π * rpm）2r/g =1.119*10-5(rpm)2r 浮力密度：K=m-mp0/p 沉降阻力：f*(dx/dt) RCF=k+ f*(dx/dt) 差速离心—密度梯度离心 操作 离心机分类：普通 6000rpm 高速 20000-25000rpm 超速 30000-80000rpm 平衡 温度-离心力-转速 转头：角转，平转，垂直转 三 凝胶电泳技术 原理 等电点：DNA pI=6.0-7.0 琼脂糖-PAG：支持介质 U=V/E=（d/t）/（v/l） =Q/(6 π rη) 电泳影响因素 1. DNA物理性质 质粒： CC＞L ＞OC 线形：㏒10M 正比 1/m 2. 介质性质 ㏒10U= ㏒10U0-KrT 分离范围：agrose：100bp-60kb PAG：5-500bp 3. 电压：5v/cm 4. 缓冲液：TAE，TBE，TPE 四 核酸定量技术