北师大版_第四章 基因工程.ppt

第四章 基因工程;三、新课标高考题目;（2010天津）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： ;（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。;四、教学建议;1.基因工程研究的理论基础;2.技术发明使基因工程的实施成为可能;;要获得转基因生物可能需要经过哪些步骤？ 需要哪些工具？;二、基因工程的工具;黏性末端;2.基因工程的缝合针——DNA连接酶;3.基因的运载工具——运载体;①能在宿主细胞内复制; 基因工程的基本操作程序;一、获取目的基因;某生物所有DNA;俗称鸟枪法;2.逆（反）转录法;3.化学方法合成目的基因 （已知目的基因核苷酸序列且基因较小）;DNA测序;PCR—聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）;含有目的基因（全部或部分序列已知）的DNA;二、基因表达载体的构建（形成重组DNA分子）;三、目的基因导入受体细胞;⑵将目的基因导入植物细胞;②基因枪法;③花粉管通道法;⑶将目的基因导入动物细胞;四、目的基因的检测和表达;⑵分子杂交检测 利用基因探针检测，用放射性或荧光标记;⑶利用PCR技术检测;lacZ基因控制半乳糖酶的合成，使培养基中的物质（X-gal）水解成蓝色，使菌落呈现蓝色;阴性克隆;2.目的基因表达的测定;⑵抗体—抗原杂交;分（离目 的基 因） 切（割目的基因和载体） 接（连目的基因和载体） 转（化宿主细胞） 筛（选阳性克隆） 表（达目的基因）; 基因工程的应用;⑵抗病（病毒、细菌、真菌）转基因植物;⑶抗逆转基因植物;⑷利用转基因改良植物的品质;转基因金大米;可用于制造血红蛋白转基因烟草;二、动物基因工程的成果;;2.基因治疗;1986年出生于美国的阿珊蒂患有SCID，身体极易受到致??菌感染，出生后一直生活在无菌玻璃罩里。1990年9月14日，美国医学家从4岁的阿珊蒂体内取出T淋巴细胞，把正常基因（腺苷脱氨酶ADA基因）插入细胞后送回其体内。 阿珊蒂接受四次基因治疗，使病情得到根本控制。;基因治疗——严重联合免疫缺陷症（SCID）;蛋白质工程;1.蛋白质工程的主要步骤;分离纯化目的蛋白质;3.蛋白质工程的进展和前景;正常情况：饭后30～60min，血液中胰岛素的含量达到高峰，120～180min内恢复正常。临床上使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰且持续180～240min，与人生理状况不符。实验表明，胰岛素在高浓度（大于10－5mol/L）时以二聚体形式存在，低浓度时（小于10－9mol/L）时主要以单体形式存在。设计速效胰岛素原则就是避免胰岛素形成聚合体。类胰岛素生长因子－I(IGF－I)的结构性质与胰岛素具有高度的同源性和三维结构的相似性，但IGF－I不形成二聚体。IGF－I的B结构域（与胰岛素B链相对应）中B28－B29氨基酸序列与胰岛素B链的B28－B29相比，发生颠倒。因此，将胰岛素B链改为B28Pro－B29Lys，获得单体速效胰岛素。该速效胰岛素已通过临床实验。 ;生物技术的安全性和伦理问题;参考资料;参考资料;参考资料;参考资料;参考资料